中文摘要：

本课题组已研究证实S100P基因可增强SKOV3和OVCAR3卵巢癌细胞系对紫杉醇、奥沙利铂和5氟尿嘧啶的敏感性。为深入探讨与卵巢癌耐药相关的基因，拟在卵巢癌细胞系中转染增强或siRNA抑制Wnt5A信号后，检测下游分子PKC、MDR1和CD44及经典通路关键分子β连环素表达及功能变化，并在三种不同化疗药物作用下观察细胞化疗耐受性的变化，从而探讨Wnt5A对卵巢癌细胞化疗耐受性的影响及可能的耐药机制。选取三个内源性表达不同水平的Wnt5A卵巢癌细胞系，在转染增强或抑制Wnt5A的同时，用PKC抑制剂预作用细胞系后以重组Wnt5A蛋白增强信号后观察其下游分子MDR1和CD44表达及功能的变化，从而探讨Wnt5A对卵巢癌耐药的调控通路，即Wnt5A可能经PKC调控卵巢癌耐药。本研究将探求新的卵巢癌耐药基因及机制，以期为卵巢癌复发和耐药治疗提供新的思路和靶点，并为卵巢癌侵袭机制研究奠定有力基础。

结论摘要：

目的Wnt蛋白成员在很多常见癌症的发生发展过程中发挥重要作用。而Wnt5a在不同恶性肿瘤中的生物学作用并不一致。有的研究认为Wnt5a具有肿瘤刺激因子的特性，在胃癌等多种恶性肿瘤中高表达，其表达与肿瘤细胞侵袭转移的潜能明显相关。而另有研究却认为Wnt5a具有肿瘤抑制因子的特性，可以减少或延缓结肠癌等恶性肿瘤的发生及侵袭转移。因此，深入研究Wnt5a与恶性肿瘤中的关系具有重要意义。然而目前对Wnt5a的研究主要集中于肿瘤细胞增殖、侵袭和转移等方面，对Wnt5a是否参与介导肿瘤细胞的化疗耐药仍然不清楚，故本实验主要研究Wnt5a表达与上皮性卵巢癌的临床病理特征及生存率的相关性，以及Wnt5a表达对上皮性卵巢癌细胞化疗耐受性的影响。方法使用免疫组化和Western blot的方法观察Wnt5a在上皮性卵巢癌，良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织中的表达。在卵巢癌细胞系SKOV3使用miRNA技术干扰Wnt5a表达，并建立稳定干扰Wnt5a基因的细胞系，通过实时荧光定量PCR、半定量RT-PCR、Western blot分析Wnt5a的表达水平。通过MTT实验观察低表达Wnt5a的卵巢癌细胞系SKOV3对化疗药物（紫杉醇、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、表柔比星和依托泊苷）敏感性的改变。在人卵巢癌细胞系SKOV3中过表达Wnt5a，采用半定量RT-PCR、Western blot和免疫荧光分析Wnt5a的表达水平。利用MTT方法检测肿瘤细胞对各种药物的耐受性。结果与良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织相比，Wnt5a在上皮性卵巢癌组织中明显高表达。高水平的Wnt5a表达与FIGO分期相关，并且提示更低的总体生存率和无进展生存率。经化疗药物处理后，低表达Wnt5a基因的干扰细胞系经化疗药物处理后细胞存活减少，显著地提高了化疗敏感性。而过表达Wnt5a增强了SKOV3细胞对这化疗药物的化学耐受性。结论Wnt5a是预测卵巢癌病人预后的一个有价值的指标。本文实验结果证实了在人卵巢癌细胞系SKOV3中Wnt5a基因在肿瘤细胞化疗药物敏感性调节中起到重要的作用。Wnt5a基因的低表达提高了SKOV3细胞对这五种作用机制不同的化疗药物的敏感性，Wnt5a基因的过表达增强了SKOV3细胞对五种化疗药物的耐受性，提示Wnt5a基因的表达水平可以影响肿瘤细胞对化疗药物的反应。