本课题在研究羊布鲁氏菌标准强毒株16M外膜蛋白蛋白质组学的基础上,对2D Western-Blot筛选的具有免疫原性和反应原性的主要外膜蛋白,通过MALDI-MS/MS质谱鉴定后,得到每个蛋白的相关生物学信息,以此作为诱饵蛋白,构建诱饵载体。用羊布鲁氏菌标准强毒株16M感染树突细胞,构建树突细胞cDNA文库,以此作为捕获蛋白,构建捕获载体。通过酵母双杂交RRS 系统筛选文库中与外膜蛋白相互作用的蛋白质分子,以进一步研究所选布鲁氏菌外膜蛋白的免疫功能和免疫机制。用筛选出来的外膜蛋白进行动物试验,研究布鲁氏菌主要外膜蛋白的免疫作用和保护功能,为研制安全有效的布鲁氏菌病新型疫苗提供功能确切的候选抗原。
proteomics;yeast two-hybrid;cDNA library;outer membrane proteins;candidate antigen
本课题在研究羊布鲁氏菌标准强毒株16M外膜蛋白蛋白质组学的基础上,对2D Western-Blot筛选的具有免疫原性和反应原性的主要外膜蛋白,通过MALDI-MS/MS质谱鉴定,得到具有高免疫原性的外膜蛋白,以此作为诱饵蛋白,构建诱饵载体。用羊布鲁氏菌标准强毒株16M感染树突细胞,构建树突细胞cDNA文库,以此作为捕获蛋白,构建捕获载体。通过酵母双杂交RRS 系统筛选文库中与外膜蛋白相互作用的蛋白质分子,筛选到了与Omp25相互作用的NDAH还原酶装备因子2及与SOD及VjbR相互作用的核糖体蛋白S5。并用筛选出来的外膜蛋白进行动物试验,研究布鲁氏菌主要外膜蛋白的免疫作用和保护功能,为研制安全有效的布鲁氏菌病新型疫苗提供了功能确切的候选抗原。完成了合同任务书规定的各项指标。