周期蛋白D1和氯通道蛋白是调节细胞通过细胞周期G1期限制点进入S期的关键蛋白,目前对这两种调控细胞周期的重要蛋白质间的相互作用知之甚少。本项目采用膜片钳、siRNA、免疫荧光、免疫印迹、能量共振转移等技术,研究了鼻咽癌CNE-2Z细胞周期蛋白D1和ClC-3氯通道蛋白在细胞周期过程中的相互作用。实验结果表明特异性沉默细胞周期蛋白D1基因,细胞周期停滞在G0/G1期,细胞增殖受抑制。周期蛋白D1对氯通道有直接修饰作用,并且在mRNA和蛋白质水平调控ClC-3氯通道的表达,周期蛋白D1通过周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK4和CDK6调节氯通道蛋白的磷酸化,从而调节氯通道的功能。能量共振转移实验提示周期蛋白D1和ClC-3蛋白之间发生了相互作用。ClC-3 siRNA抑制ClC-3蛋白的表达,抑制氯电流,减少周期蛋白 D1蛋白表达,细胞周期停滞在G0/G1期,细胞增殖减慢。结果提示周期蛋白D1和ClC-3蛋白存在相互作用,周期蛋白D1的作用靶点之一是ClC-3氯通道,而ClC-3氯通道对周期蛋白D1也有调控作用。本项目的完成拓展了我们对细胞周期调控机制的认识,对细胞周期调控机制提出了新的观点。
英文主题词Cell cycle; Cyclin; Ion channel; Interaction