中文摘要：

Duchenne型肌营养不良（DMD）是儿科临床最常见的遗传性致死性肌病，由dystrophin基因突变引起，患者大多在13岁之前失去行走能力，20岁左右死于呼吸循环衰竭，因此研发有效治疗方法迫在眉睫。近期研究表明用反义寡核苷酸（AONs）干预外显子内剪接增强子序列（ESE），诱导外显子跳读是一种有前景的治疗方法，但是ESE在外显子中的鉴定仍是有待解决的课题。我们在对DMD患者的基因筛查中发现dystrophin基因编码区微小突变（点突变、微缺失或插入）可引起外显子跳读的现象，从而推测突变处存在着与前体mRNA剪接调控相关的序列。本课题利用媒体软件预测与in vitro splicing assay相结合的方法，探讨微小突变诱导外显子跳读的机制，鉴定外显子中的剪接调控序列，为 AONs治疗DMD提供靶向位点。

结论摘要：

反义寡核苷酸（AONs）通过干预外显子中的剪接调控序列，诱导外显子跳读，恢复转录的阅读框，是目前治疗Duchenne型肌营养不良（DMD）最有前景的方法。而鉴定外显子中的剪接调控序列是设计反义药物的关键。本课题以患者dystrophin基因中可以诱导外显子跳读的微小突变为研究对象，利用媒体软件预测和in vitro splicing assay相结合的方法，鉴定出调控第25号外显子剪接的关键核苷酸，阐明了微小突变诱导第25号外显子跳读的机制，并为AONs治疗DMD提供靶向位点。另外，本课题还总结了dystrophin基因5’端和3’端突变的转录特点，对患者的临床咨询及判断预后起到很好的指导作用。并在研究工作中建立了可以同时检测dystrophin基因全部外显子缺失突变的79对引物多重PCR新体系，为DMD患者的分子诊断提供有效的检测方法。