中文摘要：

原发性高血压(EH)的发病率极高(占人群的20%)，危害巨大。线粒体融合基因2(Mfn2)是一个新发现的负调控血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的基因，在EH患者VSMCs中表达极低,但其分子机制还不明确。我们前期发现一些新的Mfn2启动子元件变异,可导致转录活性下降35%。本课题拟以此为切入点，对Mfn2的转录调控进行深入研究。首先综合前期研究结果及dbSNPs资源对Mfn2启动子进行结构和功能分析，结合定点突变技术，体外克隆启动子。通过双荧光素酶报告基因系统检测各启动子的转录活性；应用转基因鼠验证其功能，筛选出关键启动子及其变异。然后应用CHiP和EMSA对关键启动子及与其互作的转录因子进行研究。再利用RNA干扰和过表达技术验证转录因子的功能。最后，对关键启动子的构效机制进行研究。这对于阐明EH患者VSMCs中Mfn2的低表达分子遗传机制，降低该病的致残致死率及药物开发，意义深远。

结论摘要：

本课题针对原发性高血压（EH）的发病率极高，结合线粒体融合基因 2（Mfn2）是一个新发现负调控血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的基因，在 EH 患者 VSMCs 中表达极低的特点，我们从分子遗传学角度对 Mfn2 的转录调控机制进行深入研究。首先利用dbSNPs 资源对 Mfn2 基因的启动子进行结构和功能的生物信息学研究，结果发现了5个启动子区域。其中2000bp以内存在着3个启动子和39种转录因子。然后按照JNC VII标准筛选原发性高血压患者和正常对照组共800例，对Mfn2上游2000bp的调控区进行DNA提取、引物设计和和PCR扩增，然后进行DNA测序，最后对测序结果进行序列分析。通过与GENE bank的标准序列和正常对照的序列进行比对分析，我们发现了5个新的单核苷酸多态性点，且这5个位点与原发性高血压的发病率存在着明显的相关。为了进一步筛选 Mfn2 基因启动子区内可能影响该基因转录的 SNPs。我们通过双荧光素酶报告基因系统检测了各启动子的转录活性，筛选出了核心启动子，大概在538bp以内。最后综合前期研究和本研究的病例-对照研究结果以及 NCBI dbSNP 数据库资料，现已基本明确原发性高血压患者Mfn2 基因上游2000bp以内的启动子区有5个转录因子结合元件的变异，这些位点的变异可能会影响了转录因子与DNA元件的结合，从而影响了转录因子的功能。