中文摘要：

热休克因子1（HSF1）作为调控热休克反应的主要转录因子，是否能调控细胞凋亡相关基因的表达，是一全新的研究领域。申请者近年采用HSF1基因敲除小鼠以及转HSF1基因细胞，通过基因芯片发现了40个受HSF1影响的凋亡相关基因，并通过对其启动子区序列的分析，在其中8个基因的启动子区发现了完整的热休克元件（HSE）核心序列。本项目拟在进一步验证上述结果的基础上，采用凝胶滞留实验、染色质免疫沉淀（ChIP）及报道基因构建等技术探讨HSF1是否通过与上述凋亡相关基因启动子区的HSE结合而直接调控其转录活性；并采用突变质粒构建、基因转染、supershift及免疫共沉淀等技术探讨HSF1是否与其它已知调控凋亡的转录因子相互作用而调控上述基因的转录。开展本项目研究，可望发现受HSF1调控的凋亡相关基因，并阐明其调控机制，从而进一步揭示细胞凋亡调控的分子机制。

结论摘要：

本研究采用细胞生物学、分子生物学及生物信息学技术主要探讨热休克因子1（HSF1）对热应激及氧化应激所致细胞凋亡的影响及其对凋亡相关基因的可能调控机制。结果发现1）HSF1过表达能显著抑制热应激所致RAW264.7细胞凋亡，而HSF1基因敲除显著废除了HSF1对氧化应激所致小鼠胚胎成纤维细胞核仁分离和细胞凋亡。2）采用生物信息学分析发现包括Fas, Fasl, Bim,Bcl-X在内的9个凋亡相关基因的启动子区含有数量不等的HSF1结合元件，进一步经RT-PCR,Northern blot 等技术并结合转基因和基因敲除模型，分别在细胞水平和整体水平进行验证发现Fas 和Fasl 的mRNA及蛋白质表达水平随着HSF1的减少而降低，说明HSF1可能促进Fas及其配体的表达。3）采用EMSA研究发现，HSF1与Fas及Fasl启动子区HSE在体外能结合，荧光素酶报告基因技术研究发现，HSF1能促进Fas及Fasl的表达。上述结果表明HSF1在转录水平调控促凋亡基因Fas和Fasl的表达。