中文摘要：

肺转移是骨肉瘤患者最主要的死亡原因，如何有效地预防和控制肺转移是提高临床疗效的关键。伴发性肿瘤抵抗与骨肉瘤肺转移密切相关，其主要原因是促血管生成因子与抗血管生成因子矛盾的双方相互作用，进而影响肿瘤转移灶的发展。本研究通过构建可稳定表达人VEGF对应的RNA干扰质粒载体及第三代腺病毒载体，建立血管内皮细胞生长因子基因的RNA干扰技术的基因治疗平台。运用相关分子生物学、细胞生物学及酶联免疫吸附试验等方法，观察荷骨肉瘤裸鼠原发瘤是否切除以及原发瘤切除前后，TNP-470及带有VEGF干扰片段的腺病毒对肿瘤血管生成的抑制作用及其与骨肉瘤肺转移的关系，比较正相抑制血管生成方法和反相增强抑制血管生成方法的作用效果和作用特点，探讨何时进行抗血管生成治疗可以以最小的代价取得最好的效果。本研究不仅可对抗血管生成治疗骨肉瘤的临床应用提供理论指导，也为其他实体肿瘤的抗血管生成治疗提供有价值的借鉴。

结论摘要：

体外常规培养骨肉瘤细胞株MG-63，取6周龄裸鼠(BALB/c nu/nu)采用皮下接种法构建骨肉瘤模型。经研究分析，选定VEGF第3外显子作为RNA干扰序列，构建载体pSilencer3.1-H1-VEGF- siRNA。进行腺病毒Ad-VEGF-siRNA的重组，扩增和纯化腺病毒。将实验用裸鼠随机分为6组，即Ad-VEGF-siRNA治疗组、Ad-EGFP对照组、Ad-buffer对照组各2组，分别观察Ad-VEGF-siRNA对肿瘤原发灶和肺转移能力的抑制作用，同时在实验不同时间段分别检测裸鼠肿瘤灶内的VEGF表达情况。另一组实验中，首先进行内皮抑素腺病毒体外表达和和血管抑制实验；再于骨肉瘤裸鼠模型上研究内皮抑素表达水平与肺转移的关系。通过上述2组实验我们观察到，Ad-VEGF-siRNA可以显著抑制荷瘤裸鼠VEGF的表达，Ad-VEGF-siRNA治疗组原发肿瘤病灶体积较小，肺转移发生率较低；所构建的内皮抑素腺病毒体外能够显著抑制血管生成，对荷瘤裸鼠有抑制肿瘤原发灶生长和肺转移发生的作用。