中文摘要：

类风湿关节炎（RA）是常见的风湿病，致残率高，发病作用靶点在滑膜。前期的工作已经证明了CYR61在RA滑膜、成纤维样滑膜细胞（FLS）的高表达。CYR61能促进肿瘤的增殖和侵袭性。CYR61的"多重"功能与RA-FLS生物学特征相似。前期实验显示在CYR61作用下FLS侵袭力要大于正常FLS。由此，我们首次提出CYR61基因对RA-FLS的增殖和侵袭力产生影响。RA属中医"痹证"，痹阻不通是痹证发病的病理核心。复方丹参是经典的活血化瘀药物，治疗RA疗效确切。前期研究发现复方丹参能抑制CIA大鼠滑膜细胞增殖和诱导其凋亡。因此，本项目拟用逆转录病毒转染、RNA干扰技术观察CYR61对RA-FLS增殖、凋亡和侵袭性影响及复方丹参的干预作用，旨在获得CYR61直接参与RA-FLS侵袭性的可靠证据及复方丹参的作用机制，为确立CYR61作为RA研究和治疗的新靶点及复方丹参治疗RA的应用提供科学依据。

结论摘要：

本课题研究CYR61对于RA-FLS增殖、凋亡和侵袭力的生物学行为影响以及复方丹参对其过程的干预，旨在获得CYR61直接参与RA-FLS侵袭性的可靠证据及复方丹参的作用机制。本研究首先获取RA和正常人滑膜的活组织，然后进行分离和培养，获得纯化的FLS，并应用流式细胞仪对细胞表面标志物进行鉴定。然后进行CYR61慢病毒载体的包装和FLS转染，。同时应用RNAi技术，合成CYR61 siRNA瞬时转染RA-FLS；应用MTS法检测各组FLS增值率；应用Tunel法检测各组FLS凋亡率；应用Transwell法检测各组FLS侵袭能力，并应用ELISA检测各组细胞液中MMP-1,3，10,13水平；应用以上方法观察复方丹参对RA-FLS中CYR61基因和蛋白表达以及RA-FLS增殖、凋亡和侵袭力的干预作用。结果显示滑膜细胞CD90的阳性率接近98%，获得了实验需要的FLS；转染实验结果显示，两组转染效率都在90%以上；。各组FLS增殖情况结果显示，第5天的FLS细胞增殖率与细胞CYR61的mRNA和蛋白水平均呈正相关（P<0.01）；FLS细胞凋亡率与细胞CYR61的mRNA和蛋白水平均呈负相关（P<0.01）；各组FLS侵袭能力结果显示，FLS细胞侵袭力与细胞CYR61的mRNA和蛋白水平均呈正相关（P<0.01）。MMP-3与CYR61表达水平和细胞侵袭力相关（P<0.05）；.本研究结果还显示，与正常RA-FLS和小剂量复方丹参比较，大剂量复方丹参能抑制RA-FLS增殖，促进其凋亡，并且具有明显抑制RA-FLS侵袭力（P<0.05），其作用接近甲氨蝶呤。结论1..CYR61可能是通过促进RA-FLS增殖、抗凋亡达到滑膜增生，再通过增进RA-FLS表达MMP-3增强其侵袭力达到破坏关节软骨的作用；2.大剂量复方丹参能抑制RA-FLS增殖，促进其凋亡，并且抑制RA-FLS侵袭力，通过这些作用能够起到抑制RA滑膜增生和关节软骨破坏的作用。本研究发表论文4篇，其中SCI收录2篇。获得广东省科技奖励二等奖。培养博士后1名。