中文摘要：

类风湿关节炎（ RA）是多关节炎为主要临床表现的系统性自身免疫性疾病，其发病机制一直未能完全明了。近期研究表明成纤维样滑膜细胞(FLS)过度增殖以及滑膜血管新生是RA滑膜炎和关节破坏的最主要原因。申请者研究发现外周血SHH（Sonic Hedgehog）mRNA在活动性RA患者中呈高表达；SHH蛋白在RA患者关节滑膜中也呈高表达。本研究拟从FLS异常增殖和血管新生出发，采用分子生物学、细胞学和动物实验的研究方法（1）观察RA患者和正常人外周血和关节滑膜组织的SHH信号通路表达差异，探索SHH信号通路蛋白表达与FLS增生、组织血管新生之间的关系；（2）从细胞水平探讨SHH基因信号调控对FLS增殖和内皮细胞血管新生的影响；（3）观察SHH信号通路拮抗剂对小鼠胶原诱导关节炎的影响。本研究结果将揭示SHH在RA发病中的作用，有助于进一步阐明RA发病机制，有望为RA治疗提供新的思路和治疗靶点。

结论摘要：

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是由遗传和环境因素共同作用、以累及周围关节为主要临床表现的慢性炎症性自身免疫性疾病。该病的发病机制至今未能完全阐明。目前认为FLS过度增殖以及滑膜血管新生是RA滑膜炎的最主要原因。Sonic Hedgehog（SHH）信号通路在胚胎发育中发挥重要作用。在胚胎期后SHH信号通路表达大为减少。研究表明，异常激活的SHH信号通路可促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡，并可促进肿瘤相关血管新生。本研究（1）观察了活动性RA患者和对照组外周血单个核细胞（PBMCs）和关节滑膜组织中SHH通路相关分子的表达，发现活动性的RA患者的PBMCs与滑膜组织中均检测到SHH通路相关分子表达增加；（2）观察了SHH通路对FLS增殖的影响。利用体外培养的FLS作为细胞模型，予外源性SHH蛋白、特异性SHH通路抑制剂cyclopamine以及Smo-siRNA处理FLS，发现外源性SHH蛋白可促进FLS增殖，cyclopamine和Smo-siRNA可抑制FLS增殖，并发现cyclopamine和Smo-siRNA可能通过抑制FLS中SHH和Smo的表达，抑制细胞周期相关蛋白表达，阻滞细胞由G0/G1期向S期转化，抑制FLS增殖；（3）观察了SHH通路对内皮细胞凋亡的影响。采用促炎因子TNFα处理EA.hy926细胞，发现TNFα可上调EA.hy926细胞SHH通路相关分子的表达，抑制Smo受体可下调SHH通路相关分子的表达。使用cyclopamine特异性抑制Smo受体或沉默Smo基因表达可促进TNFα/ActD诱导的EA.hy926细胞凋亡；（4）初步探讨了SHH信号通路与下游RhoA/ROCK信号的关系。分别予Purmorphamine及KAAD-cyclopamine刺激和抑制FLS SHH信号通路表达，发现Purmorphamine可促进活性RhoA、磷酸化MYPT1蛋白表达，促进FLS迁移，KAAD-cyclopamine抑制活性RhoA、磷酸化MYPT1蛋白表达，抑制FLS迁移。本研究结果表明活动性RA患者体内存在SHH信号通路的异常激活，SHH信号通路可促进FLS增殖、迁移，抑制内皮细胞凋亡，可能促进滑膜增生和血管翳的形成，进一步丰富了RA的发病机制的理论，SHH信号通路可能是RA治疗的一个新切入点。