拟通过全角膜免疫荧光、双重免疫组化、激光共聚焦显微镜检测血管化角膜中新生淋巴管与新生血管的动态变化,以进一步验证角膜新生淋巴管存在"分离生长";采用基因芯片技术、蛋白组学分析筛选出导致"分离生长"的调控因子;继而运用基因敲除技术、多重免疫电镜、RNA干扰、Realtime-PCR、Western-blot等方法验证调控因子,阐明角膜新生淋巴管"分离生长"的机理。然后,通过单克隆抗体干扰其调控机理,采用荧光抗体心脏灌注、双重免疫荧光检测并评估角膜新生淋巴管的生长和退化,以明确调控机制对角膜新生淋巴管的"靶向"作用;从全新的视角探索抗淋巴管治疗的有效机制与干预时机,丰富角膜新生淋巴管领域的基础理论研究,为提高"淋巴管化"角膜病的治疗疗效和预后提供坚实的理论依据和实验数据。
cornea;lymphangiogenesis;separated growth;mechanisms;
通过全角膜免疫荧光、双重免疫组化、激光共聚焦显微镜检测血管化角膜中新生淋巴管与新生血管的动态变化,证实血管化角膜中存在着淋巴管的“分离生长”。较之角膜新生血管,角膜新生淋巴管生长期较短,但在移植免疫中扮演了更为重要的角色。继而我们采用基因芯片技术、蛋白组学分析筛选出导致“分离生长”的调控因子;运用基因敲除技术、多重免疫电镜、RNA干扰、Realtime-PCR、Western-blot等方法验证VEGF-C是促进淋巴管生长的重要调控因子,从而阐明角膜新生淋巴管“分离生长”的机理。然后,通过单克隆抗体干扰其调控机理,采用荧光抗体心脏灌注、双重免疫荧光检测并评估角膜新生淋巴管的生长和退化,以明确调控机制对角膜新生淋巴管的“靶向”作用;本研究发表SCI论文5篇,从全新的视角探索抗淋巴管治疗的有效机制与干预时机,丰富角膜新生淋巴管领域的基础理论研究,为提高“淋巴管化”角膜病的治疗疗效和预后提供坚实的理论依据和实验数据。