中文摘要：

本研究采用体内表达技术将结核分枝杆菌H37Rv株的随机酶切片段克隆入含有GFP的自杀穿梭载体pMBC167中，构建成融合基因文库。然后将此文库电穿孔入结核分枝杆菌临床分离株中构建成细菌文库，进而用此细菌文库进行巨噬细胞感染实验和感染C57小鼠实验，通过报告基因初步筛选重组子，经过二次筛选后再经过体外报告基因的筛选最终得到含有体内诱导基因（毒力基因）的重组子。最后我们进一步研究这些重组子的生物学特性并通过分子生物学的方法得到这些体内诱导基因的（毒力基因）基因序列，初步确定结核分枝杆菌毒力岛的组成和定位。

结论摘要：

本研究采用体内表达技术将结核分枝杆菌H37Rv株的随机酶切片段克隆入含有GFP的自杀穿梭载体pMBC167中，构建成融合基因文库。然后将此文库电穿孔入结核分枝杆菌野生株中构建成细菌文库，进而用此细菌文库进行巨噬细胞感染实验和感染C57小鼠实验，通过报告基因初步筛选重组子，经过二次筛选后再经过体外报告基因的筛选最终得到含有体内诱导基因（毒力基因）的重组子。最后我们进一步研究这些重组子的生物学特性并通过分子生物学的方法得到这些体内诱导基因的（毒力基因）基因序列，本试验中我们总共得到13个阳性克隆，序列分析表明有9个开放读框，分别编码与中间产物与能量代谢相关基因4个、与信号转导途径相关基因2 个、与分枝杆菌和巨噬细胞的相互作用相关的基因1个、与结核分枝杆菌持续感染相关基因1个。初步确定结核分枝杆菌毒力岛的组成和定位。