中文摘要：

肾小球内皮细胞（GEC）炎症损伤是糖尿病肾病（DN）尿蛋白形成的重要原因，内皮细胞血栓调节蛋白（TM）通过促进活化蛋白C(APC)形成及抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)等途径发挥重要的内源性抗炎功能，但调控GEC表达TM的机制及意义不明确。本项目拟在发现"肝X受体（LXR）在转录水平增强人GEC表达TM"的基础上，利用报告基因检测及染色质免疫沉淀等技术分析LXR在TM启动子区的结合位点；再通过小分子干扰RNA等技术观察LXR是否通过上调TM-APC、抑制TM-HMGB1通路而减轻培养的GEC炎症损伤；最后在体观察LXR激动剂对db/db鼠肾小球内皮细胞TM、APC、ICAM-1、VCAM-I等分子表达及DN病变的干预作用，初步揭示LXR激动剂在转录水平上调TM表达的机制及其在糖尿病肾病GEC炎症反应中的调控作用，从而为阐明以GEC炎症反应为靶标的DN发病机制及治疗提供依据。

结论摘要：

肾小球内皮细胞（GEC）炎症损伤是糖尿病肾病尿蛋白形成的重要原因，内皮细胞血栓调节蛋白（TM）通过促进活化蛋白C(APC)形成及抑制高迁移率族蛋白1等途径发挥重要的内源性抗炎功能，但调控GEC表达TM的机制及意义不明确。肝X受体（LXR）是核受体家族成员中一种重要的核受体，表达于血管内皮细胞的LXR具有重要的抗炎作用。 本实验发现人肾小球内皮细胞表达LXRα和LXRβ， LXR激动剂T0901317可刺激人GEC表达TM增加，为进一步明确T0901317主要通过LXRα还是LXRβ亚型促进TM表达，分别以LXRα和LXRβ的干扰片段转染肾小球内皮细胞，结果发现LXRα干扰片段抑制TM表达效果更强，提示T0901317主要通过激活LXRα促进TM表达。为探讨T0901317促进TM表达的机制，我们发现高糖刺激后IκBα磷酸化比例明显增加， T0901317能显著降低高糖刺激后的IκBα磷酸化和NF-κB p65磷酸化。特异性敲低GEC上的LXRα, 再以高糖刺激及T09013171处理,与无效RNA干扰对照组比较, IκBα磷酸化比例增加, 同样磷酸化NF-κB p65水平也显著增加，提示T0901317可抑制NF-κB信号通路蛋白活性，而且这种抑制作用依赖于LXRα的活化，因此LXR激动剂促进TM表达有可能与其抑制NF-κB信号通路蛋白的活性有关。进一步实验发现T0901317刺激后的HUGEC上NF-κB信号通路活性发生下降，加之免疫共沉淀法检测到LXR与P300之间有结合，因此推测LXR活化后，LXR可能通过与NF-κB竞争性结合P300而抑制NF-κB的活性，达到上调TM表达和抑制炎症介质分泌的作用。动物实验中发现T0901317组较对照组和腺病毒载体负载的TM小分子RNA干扰组明显促进db/db糖尿病肾病鼠肾组织TM表达、抑制肾组织ICAM-1、VCAM-1表达、下调外周血TNFα和IL-6水平并改善肾功水平。 总之，本项目发现GEC上的LXR活化后，LXR可能通过与NF-κB竞争性结合P300而抑制NF-κB的活性，达到上调TM表达和抑制炎症介质分泌的作用。初步揭示了LXR上调TM表达的机制及其在GEC发挥抗炎作用中的重要性。