分离培养大鼠胎脑神经干细胞,构建真核表达质粒pEGFP-N1/VEGF165,构建携带VEGF165基因的重组慢病毒载体pGC-FU- VEGF165,包装后慢病毒质粒感染经体外分离培养的NSCs细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测感染效率,Western Blot蛋白定量、MTT等实验验证慢病毒质粒转染NSCs后能够稳定表达VEGF165基因,并能促进NSCs的增殖。体内实验建立新生大鼠CP动物模型,大脑皮层立体定向注射转染VEGF165基因的NSCs,评估治疗后大鼠神经行为学及感觉运动功能,定量检测鼠脑VEGF基因、蛋白表达及其生物学效应。证实转染VEGF165基因的NSCs治疗可增加鼠脑VEGF蛋白的表达,减少脑细胞凋亡、改善脑损伤后的远期行为学功能,减轻缺氧缺血后的脑损伤,具有神经保护作用。本项目对CP的治疗研究进行了全新的探索。
英文主题词VEGF; NSCs;gene therapy;cerebral palsy