组织移植是整形外科最基本的治疗手段,移植组织在耐缺血时间之内重建血液循环是其成活的关键,研究促进移植组织血管化的方法对于提高移植组织的成活率和成活质量具有十分重要的意义。本课题拟体外分离、培养血管内皮祖细胞(EPC),构建pcDNA3.1/VEGF165及pcDNA3/bFGF质粒,扩增、提取、纯化及鉴定后,用新型的纳米微囊作为载体,介导VEGF165及bFGF双基因体外共转染EPC,以脂肪移植和带蒂皮瓣转移作为组织移植实验模型,将转基因的EPC与组织局部共同移植,联合发挥EPC的促血管生成作用和VEGF 、bFGF的促血管形成作用,试图促进有功能的血管短期内大量新生,使移植组织尽快重建血液循环,提高其成活率和成活质量。通过研究,建立一种促进组织血管化、改善组织血液循环的新的治疗方法。同时进一步探讨血管新生的机制。
组织移植是整形外科最基本的治疗手段,移植组织在耐缺血时间之内重建血液循环是其成活的关键,研究促进移植组织血管化的方法对于提高移植组织的成活率和成活质量具有十分重要的意义。本课题体外分离、培养血管内皮祖细胞(EPC),进行了pcDNA3.1/VEGF165扩增、提取、纯化及鉴定及pcDNA3.1/bFGF质粒构建、扩增、提取、纯化及鉴定后,用新型的脂质体作为载体,体外转染EPC,以脂肪移植和带蒂皮瓣转移作为组织移植实验模型,将转基因的EPC与组织局部共同移植,联合发挥EPC的促血管生成作用和VEGF 、bFGF的促血管形成作用。本实验成功体外培养、鉴定了EPC,构建了pcDNA3.1/bFGF质粒,并扩增、提取、纯化及鉴定两个质粒,体外转染EPC后,证实VEGF 、bFGF均有表达,在4天达到高峰。带蒂皮瓣的体内实验中发现,缺血皮瓣在术后内源性的VEGF及bFGF表达都有上调,但量不足够,特别是在皮瓣的远端。在体内实验中,证实VEGF及bFGF基因转染后的EPC有强大的促血管新生作用,在带蒂皮瓣和脂肪移植的动物模型上取得了较好的结果。