中文摘要：

本项目是在克隆了SH2A cDNA并分析了其表达特性的基础上，又构建了pSH2A-Myc重组表达载体，转染细胞，检测了TPK、MAPK和PKC 活性；根据所发现的PKC活性受到明显抑制这一现象，拟进一步鉴定其靶蛋白及信号转导途径，深入研究SH2A生物学功能特性；通过酵母双杂交技术筛查与SH2A相互作用的靶蛋白；构建SH2A和Myc标签重组的野生型和变异型表达载体，转染细胞；应用免疫共沉淀技术鉴定SH2A与靶蛋白的相互作用以及PLCgamma的磷酸化；本项目对新克隆的SH2A基因的深入研究及其功能鉴定，不仅可以为细胞内信号转导和药物靶标研发提供新的依据，而且有望发现与SH2A相互作用的新靶蛋白或靶蛋白新功能。

结论摘要：

项目通过构建pEGEP-SH2A载体将SH2A基因表达定位于细胞质中；通过构建SH2A野生和缺失型表达载体并转染发现野生型SH2A对细胞的蛋白激酶C活性具有强烈的抑制作用，提示SH2A可能与PLC竞争结合PKC，从而阻断信号下传；野生型SH2A还能抑制雌激素及IGF-Ⅱ对PKC的激活效应，提示可能参与其在胞浆的信号转导；MTT分析显示SH2A对细胞株的生长有抑制作用，并能强烈抑制IGF-Ⅱ的促细胞增殖作用；在酵母双杂交筛选中，构建了SH2A野生型和缺失型诱饵载体pGBKT7-SH2A和pGBKT7-SH2A-Del，使用野生型载体pGBKT7-SH2A筛选人类肾脏cDNA文库，得到了五个与SH2A相互作用的蛋白质AZGP1、HTATIP、DAD1、HSD17B10和PKM2；已构建完成含有HA标签的野生和缺失型的SH2A重组表达载体以及GST-融合表达载体，正在进行GST-pull down实验，探讨SH2A与雌激素受体hER的相互作用。同时，对NF-kB调nNOS表达机制也进行了研究。