中文摘要：

设计特异引物和高保真PCR 扩增，获编码两个几丁质结合域的几丁质酶基因BjCHI1、只编码一个几丁质结合域的BjCHI2 及只编码几丁质酶催化区的BjCHI3。将这3个基因分别克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K 上并成功实现在酵母中的大量表达。三种表达蛋白经FPLC 纯化,测定了几丁质酶活性，发现它们均能降解CM-chitin-RBV 和胶状几丁质。以CM-chitin-RBV 为底物时的Km 值分别为0.799mg/ml、0.544mg/ml 和0.793mg/ml。以胶状几丁质为底物时的Km 值分别为0.2811mg/ml、0.3883mg/ml 和1.6431mg/ml，说明几丁质结合域影响酶对不溶性底物的亲和力。三种蛋白中，只有BjCHI1 具凝集素活性，表明两个几丁质结合域是BjCHI1 具凝集素活性的必需条件，证明BjCHI1 基因编码蛋白BjCHI1是植物中的兼具几丁质酶活性和凝集素活性的天然蛋白，属于新的蛋白类型。离体分析表明BjCHI1 对真菌木霉、番茄枯萎病菌和立枯丝核菌有明显的抑制作用。农杆菌介导法将BjCHI1 及BjCHI2 导入番茄，获得对番茄枯萎病抗性增强的转基因株系，表明BjCHI1 对提高番茄枯萎病抗性有一定的作用。