中文摘要：

人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因是近年来发现的与肿瘤发生发展及预后均密切相关的基因。我们过去的研究表明，hTERT全长基因腺病毒疫苗或颗粒疫苗体内外可诱导hTERT特异性CTL反应，对hTERT阳性且MHC匹配的肿瘤细胞具有一定杀伤效应，而对自体淋巴细胞无杀伤作用，提示hTERT可作为肿瘤疫苗的共有抗原，但疫苗效果尚不尽人意。多肽疫苗具有无须载体，体外可合成等优点，但分子量小，免疫原性弱且易降解；而且不理想的肿瘤免疫可能是由于未同时诱导出针对抗原的特异性CTL和辅助T细胞反应。因此，为克服上述缺点，本项目拟在前期研究基础上，设计人hTERT CTL细胞和辅助T细胞表位的多抗原肽(MAP)疫苗，研究该MAP疫苗体内、外抗肿瘤活性，并与CTL表位单体疫苗及全长基因疫苗进行对比，同时研究其对自体淋巴细胞和DC的杀伤作用，为基于hTERT T细胞表位MAP疫苗的临床应用提供理论依据。

结论摘要：

人端粒酶逆转录酶，在维持肿瘤继续分裂、增殖和生存中发挥重要作用，常被视为一种理想的肿瘤共有抗原用于肿瘤疫苗靶标设计。多肽疫苗也常有其不足之处最大的问题在于一个多肽疫苗只能代表一个表位，分子量小，结构单一，免疫原性较弱，在体内容易降解。为解决这一弊端，1988年Tam实验室提出了多抗原肽(Multiple antigen peptides, MAP)的设计方案，其聚赖氨酸核心构成一种十分紧密有序的树状结构，它在加强了抗原表位肽链结构特异性的同时，还增大其分子质量，不仅很好的模拟了天然表位的空间构象，而且还不需要再耦联载体蛋白就能诱导较强的免疫反应；同时，其稳定的二级结构不易反转，故降解速度减缓，延长抗原刺激时间，获得更好的杀伤活性。本实验拟选取人端粒酶逆转录酶HLA-A2限制性CTL表位hTERT-540, hTERT- 865，hTERT-572Y，构建其四分支多抗原肽，并选取T-helper表位hTERT-766与hTERT-540联合构建起联合表位多抗原肽，研究其在体外体内的抗肿瘤活性。体外和离体实验均提示，人端粒酶逆转录酶MAP所诱导的杀伤效应明显高于其对应单肽诱导的杀伤效应；但对HLA-A2阳性但人端粒酶逆转录酶阴性的U2OS细胞或人端粒酶逆转录酶阳性但HLA-A2阴性的HepG2细胞均无杀伤效应，对人端粒酶逆转录酶阳性且HLA-A2.1匹配的U2OS/hTERT细胞和HepG2/HLA-A2.1细胞，提示该CTL反应具有人端粒酶逆转录酶特异性及HLA-A2限制性。同时本实验还发现，无论是人端粒酶逆转录酶MAP肽诱导的CTL，还是其对应单肽诱导的CTL对低表达人端粒酶逆转录酶的自体淋巴细胞和树突细胞都不具有杀伤效应，提示人端粒酶逆转录酶MAP肽疫苗的安全性。同时体外研究还显示人端粒酶逆转录酶联合表位（hTERT-766＋hTERT-540）的多抗原肽相较hTERT-540多抗原肽其杀伤肿瘤细胞效率提高了8.56％。综合上述结果提示人端粒酶逆转录酶MAP疫苗具有高效、安全的特点，为人端粒酶逆转录酶MAP肽疫苗的临床应用提供了实验依据。