中文摘要：

自体肿瘤细胞疫苗，由于肿瘤细胞来源困难，多作为肿瘤晚期其他治疗失败后的选择。而口腔癌位于体表粘膜，肿瘤细胞采取简便易行，可利用生体活检之瘤体组织，同时进行疫苗制备，在癌早期或术前先行自体肿瘤疫苗辅助治疗。申请者着眼于口腔癌的早期免疫治疗，利用OK-432直接杀伤癌细胞的作用，构建而成的自体肿瘤细胞疫苗- - OK-432肿瘤疫苗，其抗肿瘤效应已得到实证（X Li et al. J Dent Res. 2003, 82(8):636-640.）。本研究拟通过检测①Th1、Th2细胞因子分泌水平；②淋巴免疫细胞的趋化活性；③NK细胞和吞噬细胞吞噬能力；④核因子NF-κB活性来解明OK-432肿瘤疫苗的信号转导通路和特异性抗肿瘤免疫应答机制，并利用荷瘤小鼠进一步检测验证OK-432肿瘤疫苗在机体使用中的安全性和有效性。为体表粘膜肿瘤- - 口腔癌免疫辅助治疗的临床应用和开发奠定理论基础。

结论摘要：

针对体表粘膜肿瘤——口腔癌，其瘤细胞易于采取的特征，利用细菌类非特异性免疫赋活剂OK-432直接杀伤癌细胞的作用，构建OK-432肿瘤疫苗。经腹腔免疫实验小鼠，利用小鼠舌癌荷瘤模型，观察OK-432肿瘤疫苗抗肿瘤效应，检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的分布情况以及脾脏细胞IFN-γ，IL-2，TNFα的分泌水平。 结果显示，以glutaraldehyde（GA）为架桥剂，可使KLN-205肿瘤细胞与提纯后的OK-432产生交联，导致肿瘤细胞变性，其对移植舌癌荷瘤小鼠行免疫接种后的第10,20，30天，小鼠相对肿瘤增殖率分别为7.3%，28.1%，26.5%，疫苗免疫组不仅肿瘤细胞的增殖状态明显低于对照组，而且荷瘤小鼠30天的生存率（58.3%，n=7/12）也明显高于对照组（0，n=12/12）。表明OK-432肿瘤疫苗可以明显抑制小鼠肿瘤的增长，延长荷瘤小鼠的生存时间和存活率。 小鼠外周血T淋巴细胞亚群以及NK细胞的检测表明，OK-432肿瘤疫苗免疫后第3、7天，CD8有增高的趋势，但无统计学意义。CD3、CD4、CD4/CD8以及NK细胞明显升高，与对照组比较有显著性差异（p﹤0.05）。 小鼠脾脏淋巴细胞因子IFN-γ，IL-2以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的ELISA定量检测显示，与对照组相比，OK-432肿瘤疫苗免疫组小鼠的IL-2 、IFN-γ呈上升趋势，TNF-α分泌量显著增加（p﹤0.05）。 上述结果表明，OK-432肿瘤疫苗，可激活小鼠体内自身反应性T淋巴细胞活性，诱导抗肿瘤特异性免疫反应，抑制肿瘤生长，具有潜在的临床应用价值。