中文摘要：

及时高效地促进移植组织的血管化有利于移植后血液循环重建，但血管化过程需要一定的时间，此时期内组织仍处于缺血状态，需要进行保护干预。大量研究表明，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因治疗能明显促进有完整功能的血管大量新生，它的突变型HIF-1α△ODD解决了其生物半衰期短的缺陷；而热休克蛋白72（HSP72）具有组织保护功能，可有效保护移植组织血管化前的缺血损伤。课题组在以往研究基础上，提出应用HIF-1α△ODD和HSP72共转染异体脂肪组织源性干细胞（ADSCs）来促进缺血移植组织的成活，从体外及体内实验来证实其促组织血管新生与血运重建、组织细胞保护的效果和机制。应用异体ADSCs作为载体，可以让目的治疗基因高效表达时应用，而且发挥其细胞治疗的促血管新生作用。以期建立一种高效、操作性强、安全、代价小的促进缺血移植组织存活的新方法，为其临床应用奠定基础。

结论摘要：

项目完成情况基本完成了计划书内容，并根据实验过程中的变化及时进行了部分调整，达到了预期目的高效地促进移植组织的血管化有利于移植后血液循环重建，但血管化过程需要一定的时间，此时期内组织仍处于缺血状态，需要进行保护干预。大量研究表明，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因治疗能明显促进有完整功能的血管大量新生，它的突变型HIF-1α△ODD 解决了其生物半衰期短的缺陷；而热休克蛋白72（HSP72）具有组织保护功能，可有效保护移植组织血管化前的缺血损伤。因此，课题组在以往研究基础上，提出应用HIF-1α△ODD 和HSP72共转染异体脂肪组织源性干细胞（ADSCs）来促进缺血移植组织的成活，从体外及体内实验来证实其促组织血管新生与血运重建、组织细胞保护的效果和机制。实验进行中，发现NIH3T3细胞较脂肪干细胞更易于临床应用，易于培养、冷冻保存和复苏，易于转染。构建了重组慢病毒Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP,并进行鉴定。获得了3个稳定转染的细胞系Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP 转染的NIH3T3细胞、 Lenti/VEGF165/EGFP 转染的NIH3T3细胞 和 Lenti/EGFP 转染的 NIH3T3细胞。证实NIH3T3细胞在大鼠体内的至少可以存活3周。移植Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP 转染的NIH3T3细胞到大鼠皮瓣下可以促进血管新生和成熟，缩短皮瓣断蒂时间。体外培养了人ASCs，观察了培养特性，及与与家兔异同。进行了重组慢病毒Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP的构建，HSP72重组腺病毒对ASCs的转染和鉴定，HSP70转染ADSCs促进脂肪移植成活的研究。 取得的成果通过本课题的研究，发现HIF-1α△ODD 和HSP72的基因治疗与异体的脂肪组织源性干细胞及异体的成纤维细胞均能促进缺血移植组织的血管新生，血运及时重建，基本建立一种高效、操作性强、安全、代价小的促进缺血移植组织存活的新方法，为其临床应用奠定基础。相关的研究结果已经发表SCI收录论文1篇，投出2篇。