本研究拟分离培养牛骨骼肌卫星细胞,进行纯化和鉴定,建立体外成肌分化模型,然后通过miRNAs芯片筛选肌卫星细胞分化前后差异表达的miRNAs,通过real-time PCR验证芯片筛选结果,选出肌卫星细胞成肌分化相关候选miRNAs,利用生物信息学软件预测候选miRNAs的靶基因,分析整合后确认候选靶基因,接下来通过表达调控实验和双荧光素酶实验对靶基因进行验证,确定分化相关miRNAs,根据以上研究结果选用miRNA mimics、miRNA inhibitors或构建真核表达载体转染肌卫星细胞上调或下调miRNAs的表达丰度,通过细胞增殖及分化检测,研究分化相关miRNAs对肌卫星细胞增殖和分化的调控作用。通过这些研究,系统地阐明肌卫星细胞与miRNAs表达的相互作用机制,为肌细胞发育分化的miRNAs调控机制积累基础资料,并为肉牛新品种培育提供新的思路和有益的线索。
英文主题词bovine;skeletal muscle satellite cell;miRNAs;myogenic differentiation;