植物激素对植物生长发育具有重要的调节作用,但其含量极低,且容易被光解、热解和氧化而损失,因而不易准确测定。传统植物激素的测定方法和测定仪器均存在不同程度的局限性,生物试法操作简便,但灵敏度低;色谱法以及色谱与质谱联用法灵敏度高、重复性好,但对样品纯化要求高、且仪器成本高;酶联免疫法和放射免疫法灵敏度高、但操作繁琐、抗体制备难度大或产生放射性污染,因而难以满足目前植物激素研究的要求。本项目结合免疫技术、分子生物学技术和生物传感技术,较为系统地建立了"植物激素免疫传感测定"方法。通过原核表达制备了植物激素结合蛋白,拟将其作为传感器的高特异性识别分子;筛选成膜物质,构建了多种高灵敏度的植物激素传感器,并对检测条件和检测方法进行优化,实现了对植物激素的高灵敏度、高特异性和高效率测定;初步研制了具有自主知识产权、基于免疫传感技术的植物激素测定新仪器,为植物激素的测定开辟了新的途径。另外,改进了液相色谱测定植物激素的方法,建立了高效液相色谱切换波长同时测定多种植物激素的方法,初步开展了微量植物样品中植物激素的提取纯化技术研究。
英文主题词Phytohormones binding proteins;Immunologic assay;Biosensor;Detecting instrument