中文摘要：

本项目拟采用从天然抗体库和人工构建专用抗体库两种途径，淘选对阿维菌素族农药的高亲和力和高特异性抗体，探索抗体库技术在快速筛选制备农药抗体中的应用。天然抗体库采用英国非商用抗体库；而项目构建抗体库拟以阿维菌素族农药共性结构作为半抗原制备人工抗原，从小鼠淋巴细胞中提取总mRNA，参照相关引物设计，扩增出小鼠抗体可变区基因片段，构建噬菌体表达载体，转化大肠杆菌，建立免疫抗体库。抗体筛选拟通过多次的"吸附-洗脱-增殖"的富集性筛选完成。该抗体库的构建和筛选技术的成功将对阿维菌素族抗生素的抗体筛选和其他小分子药剂抗体筛选和抗体库技术应用有重要参考价值。

结论摘要：

本研究将人工抗原MILO-BSA免疫Balb/c小鼠。取小鼠脾脏提取总RNA，RT-PCR扩增得到360bp左右的抗体重链可变区基因（VH）和340bp左右的轻链可变区基因（VL）；进一步利用重叠延伸PCR法（SOE-PCR），将VH与VL基因片段拼接扩增得到750bp左右的目的片段。ScFv基因经SfiI和NotI双酶切后与同样经过双酶切的载体pCANTAB5E连接，电转化大肠杆菌感受态细胞，辅助噬菌体M13K07超感染后收集上清，得到库容为2.4×106的噬菌体抗体库。提取质粒鉴定目的片段与载体的连接率较高，双酶切鉴定抗体库的多样性也较好，测定滴度为2.0×1012 p.f.u /ml。该库进行特异性噬菌体的富集筛选后得到3个与包被原IVM-OVA有结合活性的阳性菌株5个与包被原MILO-OVA有结合活性的阳性菌株，并对其中1个阳性较强的菌株进行序列测定，并对其进行分泌表达，CI-ELISA检测抗体的灵敏度及特异性，线性检测方程为I＝18.902LogC+65.16（R2=0.9515），最低检测限为1.21 ng /ml，线性检测范围4.08-6096.8ng/ml。