猪瘟是由猪瘟病毒(HCV)引起的一种高度接触性传染病,是危害我国养猪业最为严重的传染病之一。HCV是属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的一种线性单股RNA病毒,结构蛋白主要有:衣壳蛋白C、囊膜糖蛋白E0(gp44/48)、囊膜糖蛋白E1(gp33)、囊膜糖蛋白E2(gp55),其中E2是HCV的主要保护性抗原。本研究拟在已建立的异源单克隆抗体技术体系基础上,制
本项研究克隆了CSFV E2基因,构建了E2蛋白抗原片断的原核表达载体,并在原核表达系统进行了E2蛋白的表达。制备并鉴定了15株抗CSFV E2蛋白猪源单克隆抗体。在分析E2蛋白生物信息学特征的基础上合成E2系列多肽,探讨了多肽溶解、偶联方法,建立了多肽-ELISA和多肽-Dot-Blot筛选和鉴定B细胞抗原表位的方法。应用重叠多肽扫描技术筛选和鉴定出E2蛋白一个线性B细胞抗原表位VSPTTLRTEV。应用随机噬菌体肽库技术研究得出猪源单抗SWmAb8识别的表位多肽基序为SPTxLR,阳性噬菌体竞争ELISA分析结果显示携带SPTxLR基序的噬菌体与单抗的结合能被病毒抗原或重组E2蛋白明显抑制,抑制率随病毒抗原浓度降低而降低,最高抑制率在35~70%。为进一步研究猪瘟病毒免疫机制奠定了基础。