在多年研究猪瘟病毒的学术积累和已构建强毒石门株基因组感染性cDNA克隆的基础上,完成兔化弱毒疫苗株(HCLV) 基因组感染性cDNA 克隆的构建。充分利用这两个技术平台,构建强毒株和疫苗株基因组突变体,即构建缺失HCLV基因组3'UTR中插入的12个核苷酸的HCLV 基因组感染性cDNA克隆和构建把插入到HCLV基因组3'UTR中的12个核苷酸插入到石门株基因组3'UTR对应位置的石门株基因组感染性cDNA克隆。对这两个突变了的cDNA克隆,分别进行体外转录、转染宿主细胞,获得猪瘟病毒的两种突变株。将两种突变株分别感染非HCLV免疫的仔猪,观察它们对实验猪是致病还是免疫保护,抵抗强毒石门株的攻击。从分子、细胞、和机体三个水平上,揭示HCLV基因组3'UTR中插入的12个核苷酸的生物学功能,为研制新一代的猪瘟疫苗提供思路和科学依据。
利用已构建成功的猪瘟病毒石门株基因组的感染性cDNA克隆,在基因组3'端非编码区第57个核苷酸之后插入兔化弱毒株(HCLV)基因组中对应的12个特征性的核苷酸;将HCLV基因组3'端非编码区置换到石门株的3'端非编码区;再从置换到石门株上的HCLV的3'非编码区中缺失12个特征性的核苷酸。分别得到插入、置换和缺失的三个突变株,并完成了分子水平和细胞水平的研究工作,即将进行机体(猪)水平的研究。继续完成HCLV基因组的感染性cDNA克隆的构建。