中文摘要：

既往认为动脉粥样硬化(AS)是由于各种危险因素导致内皮细胞(ECs)坏死、凋亡,邻近ECs修复再生、动脉中层平滑肌细胞迁移至内膜下所致。近年发现参与修复再生的ECs部分来源于干细胞，但机制尚未明确。EphrinB2特异性表达于动脉内皮细胞，体外可诱导干细胞向ECs分化。新近发现极小胚胎样干细胞(VSELs)具有多向分化潜能，若通过EphrinB2调节使其向ECs分化，改善AS形成中ECs的失衡，将对干细胞参与AS形成机制提供新思路。我们构建EphrinB2基因重组腺病毒载体并转染VSELs，以VSELs迁移与凋亡为指标，观察EphrinB2对VSELs趋化能力和抗ox-LDL诱导损伤的影响；通过ApoE敲除小鼠高脂饮食＋动脉内膜剥脱建立AS模型，观察过表达EphrinB2的VSELs对体内AS斑块的内膜/中层厚度改变及局部细胞因子变化的影响，探讨其参与AS的细胞分子机制，探寻AS防治新策。

结论摘要：

近年发现参与动脉粥样硬化(AS)修复再生的内皮细胞（ECs）部分来源于干细胞，而极小胚胎样干细胞(VSELs)具有多向分化潜能，EphrinB2特异性表达于动脉内皮细胞，体外可诱导干细胞向ECs 分化。我们通过多参数FACS成功分选和扩增GFP转基因小鼠骨髓Sca-1＋/Lin–/CD45–的VSELs，约占骨髓单个核细胞的0.04±0.015%。发现不同浓度ox-LDL（5mg/l，10mg/l，20mg/l）抑制骨髓VSELs的增殖能力，并促进VSELs凋亡。Transwell 双室模型结果显示， EphrinB2-VSELs针对SDF-1 的迁移能力较VSELs显著提高（23±2% vs 28.7±2.1%，P=0.01），不同浓度ox-LDL均显著降低细胞迁移率。成功构建Ephrin-B2重组腺病毒载体质粒转染VSELs并移植，VSELs可分化为ECs和平滑肌细胞（SMA），参与AS 斑块形成，Ephrin-B2 过表达促使VSELs更多向ECs分化，减小斑块体积。选取C57/BL6 ApoE基因敲除小鼠，通过高脂饮食制备AS模型。分为VSELs、EphrinB2-VSELs和对照组。EphrinB2显著提高VSELs向斑块形成区归巢和修复内皮的能力。组织学检测显示VSELs移植使斑块/管腔比值（P/L）显著降低（P=0.01），且在斑块局部分化为ECs和SMA。而转染EphrinB2使得VSELs的上述作用进一步增强，且向SMA分化比率降低（P=0.01）。VSELs组IL-1、IL-6、TNF-α较对照组显著降低而MCP-1和VEGF显著升高（P=0.001）；EphrinB2-VSELs组IL-1、IL-6、TNF-α也均较对照组显著降低而MCP-1和VEGF显著升高（P=0.001），且均与VSELs组有显著统计学差异（P=0.01）。我们的研究结果提示1）VSELs可通过抑制斑块局部炎症因子表达、促进趋化因子和生血管因子的表达，达到修复血管损伤的作用；2）Ephrinb2转染进一步提高上述效应，并进一步提高VSELs向内皮细胞分化的效率。从而深化对AS病理机制的认识，为AS的治疗提供一种新的干预靶点。