研究内容采用细胞培养技术、16S rRNA鉴定技术、多糖的提取技术、柱层析和HPLC技术、双向电泳技术、质谱技术、基因克隆技术、生物信息学方法、蓝藻载体构建和转基因技术,对发菜生长不同状态条件下藻细胞培养进行了优化及分子鉴定,分析了不同状态下的蛋白质表达差异,确定了发菜生长发育的特异蛋白,分离纯化了藻蓝蛋白,进行基因克隆、原核表达和结构与功能分析。研究成果(1)获得了发菜细胞液体培养技术体系;(2)对培养的发菜细胞进行了分子鉴定;(3)分离到了发菜多糖,得到了其光谱学特性;(4)得到了发菜不同生长阶段和"干-湿"不同状态蛋白质表达图谱,分别确定了38和45个差异表达蛋白点;(5)得到了高纯度的发菜生长发育重要蛋白-藻蓝蛋白;(6)克隆了藻蓝蛋白α和β亚基基因、Mn-CAT基因,Hypothetical Protein NXL-01基因并登录了GenBank (GU549478, GU549477, HM854288);(7)对克隆基因进行了原核表达并分析了结构和功能;(8)初步获得了藻蓝蛋白基因反义表达载体并实现了发菜细胞的转化。研究意义为揭示发菜生长发育的分子本质奠定基础。
英文主题词Nostoc flagelliforme; growth and development; specific proteins; gene colone; functions analysis