研究龙眼心形胚、鱼雷胚和子叶胚发育阶段的蛋白质双向电泳图谱。通过凝胶成像系统及软件分析, 确定与胚胎发育相关的特异蛋白。选择特异性强、有代表性的特异蛋白进一步分离和纯化,并测定特异蛋白的N端序列。通过与拟南芥胚胎发育蛋白数据库的比较,找出2-3个与胚胎败育相关的特异蛋白。依其N端序列设计并合成简并引物,以胚胎mRNA反转录的cDNA为模板,应用RACE方法扩增特异蛋白相关基因的cDNA全长,对特异蛋白基因cDNA进行测序及序列相似性检索,推导其全长氨基酸顺序,并进行蛋白质结构域预测,从而研究其生物学功能。该项目的完成将对揭示龙眼胚胎发育与分化的分子本质,阐明龙眼胚胎发育过程中从基因到性状表达的规律,有着十分重要的理论意义,同时也为进一步利用基因工程技术培育焦核优质果奠定下实验基础.
应用蛋白质组学技术,研究龙眼合子胚发育不同时期的特异蛋白和持家蛋白,探讨其生物学功能,为今后利用基因工程技术调控龙眼胚胎发育和选育良种提供理论依据。本研究共分离到龙眼胚胎不同发育时期上调及下调特异蛋白质43个和持家蛋白7个。通过质谱鉴定到12个蛋白质。其中蛋白质L14(MYB转录因子)、L15(FRK)和L8(F3H)与黄酮类化合物代谢相关;蛋白质L17(BCAT)和L15(FRK)是与糖代谢相关的酶;蛋白质L13(sHSP)是分子伴侣,与蛋白质折叠组装有关;蛋白质L3(mRNA sequence)与核糖体同源;蛋白质L2(FIP2)与钾离子跨膜运输相关;蛋白质L6(Pre-mRNA cleavage complex ii protein clp1-related)参与前体mRNA剪切;蛋白质L20为主要贮藏蛋白;蛋白质L16为辅酶A水解酶;蛋白质L19为Atlg1430。得到鉴定的蛋白质在龙眼胚胎发育中都有重要生物学功能。本研究克隆到与龙眼胚胎发育相关特异蛋白质F3H的 cDNA的全长序列(1456bp)。GenBank登录号为EF468104。