粘附分子P-选择素(P-selectin)作为血小板/内皮细胞活化粘附受体,早期启动炎症反应和维持炎症状态重要成分,与诸多临床疾病关系密切。为进一步研究P-选择素结构与功能,本项目利用特异引物,首先从正常人外周血小板克隆扩增出P-选择素功能域lectin和lectin-EGF片段基因,构建成真核表达质粒pEGFP-N1/lectin和pEGFP-N1/lectin-EGF,经转染COS7细胞均可见绿色融合蛋白于胞质区表达分布。构建原核表达质粒pET42b( )/lectin和pET42b( )/lectin-EGF,转染大肠杆菌BL21经诱导获得表达融合蛋白,分离纯化。以lectin-EGF融合蛋白为免疫原,成功制备了3株抗lectin-EGF单抗(B10、F3、H5),其亚型分别为IgG2、IgG1和IgG3,轻链均为κ型。所获抗P-选择素功能域单抗均能与lectin-EGF融合蛋白特异结合,并识别不同抗原决定簇。进一步发现该单抗具备与经LPS刺激人脐静脉内皮细胞表达的天然P-选择素特异结合;阻断经凝血酶激活的血小板与中性粒细胞的粘附;以及在肾炎鼠体内抗粘附/抗炎的防治效果等功能。为进一步进行研究P-选择素结构与功能及其抗粘附治疗研究提供基础。
英文主题词P-selectin; domains; cloning and expression; monoclonal antibody; function