博尔纳病病毒(BDV)属于中枢神经系统新发人畜感染性病毒,感染后出现神经精神症状,临床上称为博尔纳病(BD),病原学诊断困难和发病机制不清,严重影响临床诊断和治疗。该课题应用细胞转染技术建立了BDV核蛋白和磷蛋白的稳定表达体系,用荧光显微镜观察核蛋白和磷蛋白的表达情况;应用MTT技术观察到BDV核蛋白和磷蛋白对OL细胞的增殖有明显的抑制作用;采用荧光定量巢式RT-PCR检测119例宁夏地区病毒性脑炎患者外周血、脑脊液及205例牛、978例绵羊外周血、脑组织BDV p24和p40片段,经过基因测序和BLAST检索证实了存在BDV的感染,且通过观察核酸序列及转录后氨基酸序列的同源相似度,提示可能存在动物和人之间的相互交叉传播感染;建立了激光共聚焦显微镜技术观测单一细胞核酸变化的细胞CT技术,结合Western blot技术观察到BDV核蛋白主要在细胞膜和细胞浆中表达;构建了宁夏地区人畜BDV感染的种系发生树,提示可能存在动物和人之间、德国-宁夏-日本间的相互交叉传播感染。该研究结果为BDV感染诊断、治疗和深入研究提供实验室依据,为其它病毒的研究提供了新的途径。
英文主题词BDV;central nervous system infection;fluorescence quantitative nested RT-PCR; confocal laser microscopy technology; molecular epidemiology