用天然无致病性I型MDV CVI988病毒株进行VP22 基因克隆,并与其他致瘤毒株的VP22基因序列分析比较;在原核和真核表达系统表达,测定MDV VP22的蛋白传导作用, 研究携带进入细胞的DNA是否表达,是否发挥其正常的生物学作用;研制抗MDV VP22特异性单克隆抗体,以此确定感染MDV 的CEF不同时期的VP22定位,探索VP22在病毒的感染和扩散中的作用;构建VP22与IBDV-vp2基因或其他重要病原保护性抗原基因融合表达质粒, 研究VP22在机体内传导,诱导机体产生免疫学反应以及产生免疫增强作用。本研究对于了解MDV VP22蛋白传导作用和在致病机制中的功能具有重要的理论和实践意义。
血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)的UL49h基因与I型单纯疱疹病毒(HSV-1)UL49同源,编码病毒被膜蛋白VP22, 对病毒的复制和传播有着非常重要的作用。 本项目对不同致病型MDV VP22蛋白的序列进行比较和分析,发现强毒株GA株、超强毒RB1B株和特超强毒648A株的VP22长度保持750bp,但CVI988弱毒株的VP22基因C端存在一个缺失性突变201TKSERT206。用CVI988弱毒疫苗株VP22羧基端原核表达产物免疫小鼠,研制出5株抗VP22的特异性单克隆抗体,这些单抗至少针对两种不同抗原表位;用抗体检测MDV-1不同毒株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)时发现,当感染量PFU=50时, MDV各不同致病力的毒株(GA, RB1B和CVI988株)VP22最早在3 h时开始向病毒感染细胞的邻近细胞核内扩散; 证明CVI988 VP22对蛋白转导功能并没有明显影响, 且完整长度的VP22具有最高效的携带目的蛋白转导的功能。N1-18具有潜在的核定位特性,对VP22转导功能的发挥意义很大;VP22T(C207-249)影响VP22的胞浆定位及蛋白转导效率。