中文摘要：

黑色素瘤恶性程度高，发展迅速，预后差，并对放疗和化疗不敏感，免疫治疗已成为临床主要治疗措施。研究靶向性的特异性肿瘤疫苗正逐渐成为免疫治疗的重要方式。热休克蛋白（Hsp70）作为疫苗载体，可明显增强黑色素瘤抗原1（MAGE-1）的免疫原性，目前我们研究发现Hsp70与MAGE-1融合蛋白能够激活小鼠的细胞免疫和体液免疫反应。但是，如何有效得定向释放药物是其实际应用的急待解决问题。本课题在前期研究基础上拟采用多聚体超声微泡，携带Hsp70与MAGE-1融合蛋白，于浅表淋巴结周围皮下注射，行经皮淋巴超声造影，并在造影剂进入淋巴结内后，将其定点击碎，达到靶向释药，有效诱导机体抗肿瘤免疫反应。通过观察融合蛋白的抑瘤效应，验证多聚体超声造影微泡作为新型可控的蛋白疫苗载体的可行性。本研究不仅为靶向性肿瘤生物治疗提供新方式，也为可控的药物载体的临床应用提供了研究思路。

结论摘要：

本研究采用多聚体超声微泡，携带 Hsp70 与 MAGEA1 融合蛋白，于浅表淋巴结周围皮下注射，行经皮淋巴超声造影，并在造影剂进入淋巴结内后，将其定点击碎，靶向释药，检测外源抗原抗体表达，监测机体抗肿瘤免疫反应。利用小鼠黑色素瘤细胞成瘤特性，检测多聚体超声微泡携带融合蛋白、单纯融合蛋白及微泡的对照组，小鼠成瘤组织体积生长曲线和生存曲线。利用多聚体超声微泡携带HSP70-MAGEA1融合蛋白作为肿瘤疫苗，对正常小鼠进行种瘤前的免疫，验证其作为新型可控的蛋白疫苗载体的可行性。从而为靶向性肿瘤生物治疗提供新方式，也为可控的药物载体的临床应用提供了研究思路。本研究主要获得以下研究成果 1. 制备得到了以 PEG6000 (15%)，Tween80 (3.5%) 为膜材料，以 SF6 为填充气体，以葡萄糖为稳定剂，表面具有 PEG 结合臂的新型多聚体微泡。将HSP70-MAGEA1融合蛋白包裹于脂质体内，然后与新型多聚体微泡混合，制备得到了携带有HSP70-MAGEA1融合蛋白的新型多聚体微泡复合体。 2. 成功将携带有HSP70-MAGEA1融合蛋白的新型多聚体微泡复合体，于浅表淋巴结周围皮下注射，行经皮淋巴超声造影，并在造影剂进入淋巴结内后，将其定点击碎，达到靶向释药，在淋巴结内成功检测到了HSP70和MAGEA1抗体的表达，且发现使用多聚体微泡携带融合蛋白的方法与单纯融合蛋白相比，更加有效的诱导了机体抗肿瘤免疫反应。 3. 携带有HSP70-MAGEA1融合蛋白的多聚体超声微泡与单纯HSP70-MAGEA1融合蛋白及单纯多聚体超声微泡相比，能够更加有效的诱导机体的抗肿瘤免疫反应。对小鼠黑色素瘤体积的生长产生较强的抑制，从而提高黑色素瘤小鼠的生存时间。与此同时，将这三组肿瘤疫苗先多次免疫正常小鼠，然后制备黑色素瘤小鼠模型，结果发现携带有HSP70-MAGEA1融合蛋白的多聚体超声微泡肿瘤疫苗能够显著的延缓肿瘤的发生，减小肿瘤的体积，提高小鼠生存时间和生存比例。