成纤维细胞(FB) 和肌成纤维细胞(MFB)在增生性瘢痕(HS)形成中发挥重要的作用。骨髓来源的循环纤维细胞(CFC)自血液浸入组织后,在转化生长因子-β1(TGF-β1)作用下,可分化为FB/MFB,组织内FB/MFB数量明显增加,CFC也可能参与了增生性瘢痕的形成。我们前期研究发现,仍处于增生期的人HS边缘部分组织中,CFC、FB、MFB及由CFC分化来的FB/MFB的数量,较已软化的中央部分显著增多,提示HS自增生-消退期,这三种细胞数量是动态变化的。本课题拟在兔耳HS模型完成:1.检测HS不同时期,组织中三种细胞数量和分布的动态变化;2.单独或联合以血清淀粉样蛋白P(SAP)和抗TGF-β1中和抗体在不同层面阻断CFC分化,观测三种细胞数量和分布的动态变化,及对HS形成和消退的作用。此课题力图阐明CFC、FB和MFB的动态变化与增生性瘢痕形成、消退的内在关系,拓展瘢痕研究的新方向。
circulating fibrocyte;wound healing;transgenic GFP rabbit;hypertrophic scar;Mesenchyal epithelial transition
循环纤维细胞(CFC)参与伤口愈合和瘢痕形成中,为了研究CFC在兔耳增生性瘢痕形成中的作用,我们应用多重染色技术,标记CFC、成纤维细胞(FB)和肌成纤维细胞(MFB),并检测了三种细胞在瘢痕形成与消退中的动态变化。CFC在伤口愈合早期3天即出现,7天左右达到顶峰,10天明显下降,2-3周消失。而FB和MFB在7天左右开始增多,2-3周天达到顶峰并维持1周,此后缓慢下降,组织内胶原含量与FB和MFB变化一致,而较CFC变化推迟7-10天。血清淀粉样蛋白P(SAP)与TGF-β1中和抗体均可以抑制CFC的生成和浸润组织内,伤口中CFC、FB和MFB均显著下降,以CFC显著,同时伤口愈合时间延迟4-7天,组织内胶原蛋白明显降低。同时发现,除瘢痕皮下真皮层,在上皮层也有染色阳性的CFC;为进一步证实这种现象,同时动态检测CFC在伤口愈合中的迁移变化,在不表达GFP的兔耳形成增生性瘢痕模型,在同窝但表达转基因GFP(+)的兔采外周血,分离并收集浓集的CFC细胞,回输入GFP(-)瘢痕模型兔中。3天后,兔耳伤口的软骨表面的肉芽组织内发现有GFP(+)细胞,同时CD34(+)和CD45(+)染色均阳性;随着伤口愈合瘢痕形成,7-14天,这些GFP(+)的CFC细胞,慢慢从肉芽组织中向伤口表面迁移,愈合的伤口上皮层中也发现有GFP(+)的CFC,进一步染色发现这些细胞有的上皮标志物染色提示CFC细胞可能参与了伤口愈合,在迁移中逐渐分化成上皮细胞,具有间质上皮化的作用。