中文摘要：

本项目基于中医肾主生殖理论，结合骨髓可能参与卵母细胞再生的新近发现，以及补肾养血法则(归肾丸)治疗卵巢早衰、不孕症有效的临床事实，提出"肾主骨、生髓与肾主生殖有内在的联系，补肾养血可能通过骨髓促进卵巢卵母细胞再生，改善生殖功能"的假说。将以放射性损伤/化疗损伤小鼠卵巢早衰模型为研究对象，应用分子生物学、免疫组织化学、流式细胞技术及形态学定量方法等技术，观察外周血雌孕激素、FSH、LH等激素及受体在卵巢的变化，卵巢局部AMH、GDF-9、BMP-15等细胞因子，生殖细胞的标记抗体在骨髓、卵巢内细胞中的表达,并对各级卵胞形态、类别进行判定，明确骨髓、卵巢间的内在关系，并用归肾丸对模型干预，探讨归肾丸对模型小鼠的骨髓造血机能、卵巢储备功能的影响，对其内在关系进行阐释，验证假说，为补肾养血法则防治卵巢早衰、改善卵巢储备功能，及传统中医更好地与现代生殖医学相结合治疗不孕症提供实验依据。

结论摘要：

本项目构建卵巢早衰动物模型，应用分子生物学、免疫组织化学、流式细胞技术及形态学定量方法等技术，观察模型小鼠外周血常规、FSH、LH、雌、孕激素，卵巢局部AMH、GDF-9、BMP-15等细胞因子的变化，同时，对小鼠骨髓、卵巢及其细胞的形态、类别和功能进行判定，明确骨髓、卵巢间的内在关系，并以归肾丸进行干预，探讨补肾养血法则对模型小鼠的骨髓造血机能、卵巢储备功能的影响，并对其内在关系进行阐释。 实验结果显示归肾丸可以一定程度上改善卵巢早衰模型小鼠的卵巢功能。其表现为该方可以修复造模引起的卵巢形态学损伤、提高子代小鼠的健康状况、调节机体激素水平、增加卵巢储备。其机制为第一，该方可以调节生殖干细胞标志物DDX4以及OCT4在骨髓及卵巢中表达，从而改善生殖干细胞功能，通过卵细胞再生从来源上增加卵巢储备。第二，该方调节卵巢局部卵泡调控因子AMH、BMP15、GDF9的表达，调控卵巢颗粒细胞凋亡相关因子Bax、Caspase3、Bcl-2的表达；同时提高外周血及卵巢局部的免疫功能。总之，归肾丸可能通过改善骨髓干细胞的分化，改善卵巢局部的微环境的途径改善卵巢早衰模型小鼠的卵巢功能，部分验证了本课题提出的“肾主骨、生髓与肾主生殖有内在的联系，补肾养血可能通过骨髓促进卵巢卵母细胞再生，改善生殖功能”的工作假说。