中文摘要：

炎症贯穿于动脉粥样硬化发生发展全过程。前期研究我们发现内皮细胞高表达miR-221/222通过抑制转录因子ETS-1的表达能减轻AngII诱导的内皮细胞炎症反应且该miRNA簇在ApoE-/-小鼠颈总动脉表达降低。本课题拟研究上述miRNA在抑制动脉粥样硬化斑块增殖中的作用。硅胶圈植入法制作ApoE-/-小鼠颈总动脉斑块快速形成模型。原位杂交、免疫组化检测对照和模型小鼠颈总动脉上述miRNA及靶基因的表达差别；干预小鼠主动脉内皮细胞上述miRNA表达， Western blot等方法检测靶基因表达、内皮细胞炎症反应、活性氧簇产生等表型变化；慢病毒miRNA表达系统感染模型小鼠颈总动脉段，原位杂交、免疫组化等方法检测miRNA和靶基因在感染部位的表达并观察单核细胞浸润及斑块面积的变化。结果有望进一步阐明miRNA在动脉粥样硬化斑块增殖和炎症反应中的作用，为动脉粥样硬化防治提供实验依据和新靶点

结论摘要：

研究背景microRNAs（miRNAs）是一类长约 22 个核苷酸的非编码小分子RNA，通过抑制靶基因的转录后翻译抑制或降解靶 mRNA参与调节细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程。成熟的动脉平滑肌细胞具有分化和增殖两种表型。在不同生理和病理因素的刺激下，这两种表型可相互转换。生理状态下，动脉平滑肌细胞呈分化表型，维持正常血管管腔结构，舒张、收缩等生理功能。而在病理状态下，动脉平滑肌细胞呈增殖表型，引起动脉粥样硬化、中膜增生和血管管腔狭窄。目前，关于miRNA在调控动脉平滑肌细胞表型转化中的作用还知之甚少。主要内容和结果本项目主要建立小鼠颈动脉缩窄模型和体外PDGF诱发人主动脉平滑肌细胞向增殖表型转换等模型，通过miRNA芯片筛选出在这一过程中表达量变化显著的miRNA。结果发现miR-663，miR-638，miR-612等在动脉平滑肌细胞向增殖表型转化过程中下调最显著；同时，miR-368，miR-376a，miR-222，miR-221表达上调。由于芯片结果提示miR-663表达水平在 PDGF刺激3 h，6 h，24 h 后呈梯度降低，且下调趋势最为显著，因此本项目选定该miRNA作为进一步研究对象。定量PCR实验进一步证实，在血管平滑肌细胞中，PDGF诱导的miR-663表达下降4-5倍，且呈时间和剂量依赖关系。另一方面，当动脉平滑肌细胞培养于诱导分化培养基中时，miR-663表达量升高6-8倍，同时伴随动脉平滑肌细胞分化标志基因SM22α、SM-α-actin、calponin、MYH11等的表达上升。进一步研究显示，腺病毒介导的血管平滑肌细胞过表达miR-663后，动脉平滑肌细胞分化标志基因表达量增高6-10倍，提示miR-663是维持动脉平滑肌细胞分化表型的重要miRNA。此外，过表达miR-663能够有效抑制PDGF诱导的动脉平滑肌细胞迁移和增殖。相反，下调miR-663的表达可促进细胞的迁移和增殖。生物信息学检索发现转录因子JunB及其下游myl9是miR-663的靶基因，报告基因和Western blot提示过表达miR-663能够抑制两者的表达。采用腺病毒介导方式将miR-663导入小鼠颈动脉斑块增殖模型后，斑块面积下降约50%，并且免疫荧光染色显示这一过程伴随JunB的表达量下降，提示miR-663具有抑制动脉斑块形成和增殖的潜在治疗作