利用ETEC大肠杆菌口服断奶仔猪而建立断奶仔猪腹泻模型,HE染色观察了胃肠道组织的病理学变化;利用免疫组化、Western Blotting及荧光定量PCR技术研究了PAR-2、Claudin-1、Occludin及ZO-1 基因和蛋白在不同腹泻时期胃肠道中的表达水平的变化;并用ELISA等方法检测了血浆和组织匀浆中胃肠道屏障功能相关指标的变化;通过猪小肠上皮细胞体外分离培养技术,研究了PAR-2激动剂对猪小肠上皮细胞分泌IL-6和IL-8的影响,以及对其细胞间TJs蛋白表达的影响。结果发现,PAR-2在断奶仔猪整个胃肠道组织中都有表达,并且主要表达于胃肠道组织粘膜层的固有层,其蛋白和基因mRNA表达水平随仔猪腹泻程度也发生明显变化,与胃肠道粘膜屏障功能呈负相关趋势;胃粘膜组织中氨基己糖和磷脂,血浆中内毒素、TNF-α、IL-6及DAO的含量都有明显的变化;PAR-2能够刺激猪小肠上皮细胞分泌IL-6和IL-8,以及使其细胞间的Claudin-1、Occludin及ZO-1三种TJ蛋白表达量下降,并且在此过程中PAR-2与LPS+LT具有协同效应。
英文主题词weaning piglets;protease activated receptor-2; diarrhea;TJs