中文摘要：

不可分型流感嗜血杆菌(NTHi) 是造成中耳炎(OM)主要致病菌之一,该菌在儿童的感染率呈上升趋势。文献报道中耳炎病原体成分或细胞因子是导致内耳机能障碍的客观原因，但其潜在机理不明。且新发现的NTHi外膜 E蛋白(PE)可参与上皮细胞粘附、促炎症细胞因子表达。本课题拟在前期研究的基础上，根据NTHi P38 MPKA和NF-kB炎症反应信号通路的理论，通过NTHi野生株和PE缺陷株作用于A549、HMEEC-1细胞、小鼠中耳上皮细胞，诱导中耳炎炎症反应。比较TLRs在共聚焦显微镜免疫荧光强度及RT-PCR mRNA的差异表达,借助流式细胞、ELISA方法对不同时间点的细胞因子ICAM-1、IL-8、TNF-α、炎性细胞的动态检测，以探明PE促炎症反应的信号通路及分子机制，揭示PE对中耳炎致病作用，可望为生物制药靶位选择及临床有效干预中耳炎的发生，提高儿童的健康素质，提供科学依据。

结论摘要：

不可分型流感嗜血杆菌(NTHi ) 是造成中耳炎(OM)主要致病菌之一, 该菌在儿童的感染率呈上升趋势。本课题从临床鼻窦炎和中耳炎患者中分离出流感嗜血杆菌，通过荚膜PCE鉴定筛选出不可分型流感嗜血杆菌，提取总 RNA。进行 RT-PCR 逆转录，以证明其E蛋白mRNA 的表达，并对疾病及健康标本的E蛋白mRNA的定量PCR结果进行了对比。从分子水平上提示，E蛋白mRNA的增高与疾病的发生炎症的程度是相关的。同时，为了从蛋白水平验证E蛋白在疾病炎症的情况下的表达水平增高，本研究中将流感嗜血杆菌临床菌株的E蛋白基因克隆入原核表达载体Pet-28a(+)，转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，用含相应抗性的LB平板筛选转化子，经IPTG诱导表达后，，检测E蛋白在活细菌中的表达水平，用高压液相法纯化出E蛋白单体，吸取上清，与弗氏完全佐剂混匀之后免疫家兔，获得多克隆抗体。