高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌等恶性肿瘤的发生有关。HPV在常规细胞培养中不能完成其增殖性生活周期,没有子代病毒产生。这是HPV人工培养困难、生活周期研究受阻的主要原因。本项目拟建立高危型HPV58感染的酵母增殖模型,并进一步研究探讨HPV早期基因E6、E7对病毒生活周期晚期阶段的调控功能。将HPV58型的基因组DNA导入酿酒酵母菌或酵母原生质体,验证酵母细胞中HPV58 DNA复制,衣
人乳头瘤病毒(HPV)是一类无包膜的DNA肿瘤病毒,高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈癌等恶性肿瘤的发生有关。HPV在常规细胞培养中不能完成其增殖性生活周期,没有子代病毒产生,这使得HPV人工培养困难,生活周期研究受阻。本研究成功将HPV58型全基因组直接转化入啤酒酵母细胞,证明HPV58基因组在酵母中以游离体复制形式稳定存在,并首次证实了在酵母中HPV58基因组早期和晚期基因的转录表达,从而建立高危型HPV58转化的酵母增殖模型;进一步应用此酵母模型,初步探讨了HPV58生活周期中E2和E7早期基因的功能。为深化课题研究,同时建立了HPV酵母无细胞培养系统,开展了酵母无细胞培养系统中HPV58L1蛋白体外翻译的研究,揭示了长、短两种L1蛋白表达差异的原因,并首次成功在此系统中包装出L1 病毒样颗粒(VLP)。上述研究为进一步探讨HPV基因在病毒生活周期中的调控功能奠定了实验基础;HPV酵母无细胞翻译系统的建立为研究HPV VLP组装机制以及抗病毒抑制物的筛选提供了一种便利的研究工具;有重要的理论和应用价值。