中文摘要：

视神经损伤后大量视网膜神经节细胞（RGCs）继发死亡，是不可逆视觉功能减退的主要原因。近年来越来越多的趋化因子及其受体被证实具有神经保护作用，这些发现为神经损伤疾病的治疗开拓了新的领域。我们在前期研究中发现CCL19，CCL25及CCL27对原代神经元具有促进存活的作用。为了解这些趋化因子对RGCs是否也有保护作用，我们在前期工作中用免疫组化法鉴定了CCR7,9,10在正常大鼠RGCs上的表达，这使研究CCL19，CCL25及CCL27对RGCs的作用成为可能。本课题拟利用大鼠视神经夹挫伤模型及原代培养的RGCs探索CCL19，CCL25及CCL27对RGCs的作用。通过观察视网膜结构、RGCs凋亡,检测GAP-43及Bcl-xL, BAX和μ-calpain在视网膜的表达变化，以期提供CCL19，CCL25及CCL27对RGCs作用的实验依据，为视神经损伤疾病的治疗提供有价值的实验依据。

结论摘要：

视神经损伤后大量视网膜神经节细胞（RGCs）继发死亡，是不可逆视觉功能减退的主要原因。研究发现，许多趋化因子及其受体具有神经保护作用，这些发现为神经损伤疾病的治疗开拓了新的领域。课题组利用体外培养的原代皮质神经元和PC12细胞株（50nM神经生长因子NGF诱导PC12细胞分化为交感神经元样细胞）研究趋化因子CCL19对神经元是否具有神经营养作用。同时，为了研究CCL25（TECK）是否通过其受体CCR9发挥作用，pEGFP-N1/CCR9重组载体被转化至PC12细胞株。实验中不同浓度的TECK（50、100、200、300、400nM）被加入转染后的PC12细胞及原代皮质神经元培养液中，同时设立对照组。研究发现趋化因子CCL25（TECK）在一定浓度范围内（50-200nM）确实可以通过其受体CCR9对PC12细胞、原代皮质神经元具有促进存活的作用，但当TECK浓度≥300nM时相反导致神经细胞衰亡，说明CCL25（TECK）在体外有抗神经细胞凋亡的作用但浓度范围较为狭窄。同时，我们的研究结果还显示CCL25对PC12细胞的保护作用是通过其受体，并很有可能通过PI3K/Akt信号转导途径。本课题同时检测了CCL19,27对神经元的作用，未发现它们对神经元具有保护作用。为了建立检测神经营养的实验动物模型，本课题采用50g力度夹持钳夹持的方法成功建立了大鼠视神经夹挫模型（成年SPF级雌性SD大鼠随机分假手术组和手术组，手术组做视神经挫伤模型，假手术组仅分离视神经，不进行夹持）。手术组与假手术组再分别按损伤后不同时间点设置不同亚组，行HE染色及TUNEL凋亡实验，检测视网膜RGCs在相应时间点的形态变化和凋亡情况。我们的研究发现视神经损伤后3天视神经节细胞（RGC）出现明显减少（p＜0.05），同期TUNEL法检测后发现RGC凋亡明显，受损视神经小胶质细胞活化且数量明显增加，突起变短、变粗，胞体增大、而星状胶质细胞减少。视网膜RGC这种凋亡趋势与临床上所观察到的视神经损伤（TON）患者进行性视功能下降的趋势一致，我们的研究表明实验所采用的固定压力钳夹法能建立稳定的大鼠视神经损伤模型，可获取随时间变化的视神经及视网膜细胞病理改变。为研究该模型状态下继发性损坏如炎性情况、毒性物质、氧化物等与RGC凋亡相关性打下了较好的基础，为视神经损伤疾病的治疗提供有价值的实验依据。