中文摘要：

微波辐射可损伤男性生殖功能。我们对近10年2000多男性不育症病例进行病因回顾时发现，有约38%的患者接受过医用微波过度治疗。从这些病例进行治疗发现，中医药治疗这种微波辐射性男性生殖功能障碍有疗效，但欲提高疗效，正确辨证是关键。本课题旨在研究微波辐射导致男性不育症的机理、中医证候及治疗方法。课题以2450MHz微波辐射损伤小鼠为研究对象，采用"以方测证"方法，用男性不育症各临床证候的代表方药治疗受损小鼠，应用睾丸活检、精液检查观察疗效，以此判定其证候。应用激光扫描共聚焦显微镜，研究小鼠受损精子亚细胞结构的变化；研究小鼠精子膜的流动性及通透性、细胞内Ca2+及其跨膜通道、膜电位等的改变；应用双向凝胶电泳、质谱分析研究小鼠受损精子蛋白质组的差异蛋白。从蛋白质组成、精子亚细胞结构及细胞功能多层面，系统研究微波辐射损伤所致的雄性小鼠生殖功能障碍的机理及中医证候基础。

结论摘要：

⒈明确了中医证候微波辐射可致男性不育症，目前中医仅有的单方对症治疗往往难以解决复杂问题，故证候学研究很有意义。男性不育症病因的复杂性及微波辐射的损伤特点使得临床单纯病因证候研究极为困难；形成于望闻问切的证候很难从形体各异且无以言表的动物获取，因此“以方测证”是动物实验中判断证候的最佳选择。本研究通过循证医学方法确定了男性不育症临床证候并遴选代表方剂，即肾阳虚证-金匮肾气丸、肾阴虚证-左归丸、气血两虚证-十全大补丸、肝郁气滞证-柴胡疏肝散、痰湿内阻证-苍附导痰汤、肝经湿热-龙胆泻肝汤、寒凝血瘀证-少腹逐瘀汤，用不同证型的代表方分别治疗微波损伤小鼠，从疗效来判定证型。应用频率为2450MHz、功率密度为10mW/cm2微波，每天辐射1h，辐射18d；或功率密度不变加大4倍辐射时间；或辐射时间不变加大4倍功率密度，造成雄性小鼠生殖功能障碍。实验结果表明，金匮肾气丸对精子总活率、快速向前运动精子率、畸形精子率、体睾比及病理改变全部有显著疗效，表明微波辐射致雄性小鼠生殖功能障碍为肾阳虚证。其他方剂仅对部分精液参数偶有疗效，表明可能有兼证存在。⒉明确了中医证候基础⑴通过细胞病理学研究，发现辐射后小鼠睾丸各类生精细胞排列不整齐，层次不清楚，精母细胞、精子细胞变性、坏死脱落，精细数目明显减少，但精原细胞形态基本正常；加大功率密度或加大辐射时间，小鼠睾丸精原细胞肿胀，偶见精原细胞溶解、消失，多数生精细胞管腔内无精子细胞存在。⑵通过细胞亚结构及功能研究，发现微波辐射后小鼠生精细胞膜的流动性显著变低；小鼠生精细胞的膜电位降低；生精细胞钙离子浓度增高，生精细胞内质网钙通道蛋白（RyRs）表达下调。⑶细胞蛋白质组学研究，发现微波辐射后小鼠生精细胞中的蛋白质组成出现很大的变化，表达突出的差异蛋白有5种，其中线粒体NADH脱氢酶[泛醌]铁硫蛋白6、蛋白磷酸酶同源蛋白2、线粒体ATP合成酶gamma亚基、40S核糖体蛋白S17表达下调，小泛素化相关修饰物3上调。⒊明确的金匮肾气丸的治疗机理金匮肾气丸可以使受损小鼠睾丸生精小管界膜恢复完整平坦，生精小管内可见成熟精子，生精细胞排列较为整齐，层次清楚；可以显著改善小鼠生精细胞膜的流动性；可以增加生精细胞的膜电位，改善了膜的通透性，抑制了生精细胞的凋亡；可以降低生精细胞钙离子浓度，上调生精细胞RyRs表达。但对蛋白质损伤的修复并不明显。