在前期工作的基础上,进一步扩展了天蓝色链霉菌M145中双组分调控系统(TCS)的缺失突变体库,并筛选得到6个与抗生素合成相关的TCS突变体。本项目重点研究了两组在特定氮源培养条件下发挥功能的TCS(AfsQ1/Q2和RarR/K)。应用基因芯片结合凝胶阻滞及DNA足迹法等实验,基本阐明了AfsQ1/Q2及RarR/K条件性参与次级代谢调控的机制。研究表明,应答调控蛋白RarR和AfsQ1均为自身转录调控因子,并通过直接调节途径特异性调控基因(如RarR作用于actII-ORF4,redZ及kasO,AfsQ1作用于actII-ORF4与redZ)的转录影响相应抗生素的合成;同时,确定了RarR结合的顺式作用元件,并通过转录分析证实RarR/K只有在含有不同氮源的MM上才出现明显转录,揭示了rarR/K缺失突变体在这类MM出现表型变化的原因。实验还显示,AfsQ1参与包括amtB,gdhA,glnA及glnII等在内的很多氮代谢基因的转录调控,说明AfsQ1可能同时调控了初级代谢和次级代谢。此外,还发现了TCS间的cross-talk。
英文主题词Strepotmyces coelicolor,two-component regulatory system,secondary metabolism,nitrogen metabolism, transcriptional regulation