中文摘要：

针对地克珠利显著下调鸡柔嫩艾美耳球虫（E. tenella）第二代裂殖子肌动蛋白解聚因子(Actin-depolymerizing factor，ADF)mRNA表达量及抑制球虫入侵这一前期研究结果。本项目拟通过人工接种鸡E. tenella孢子化卵囊，建立地克珠利抗球虫体内试验模型，以E. tenella第二代裂殖子为研究对象，采用Western blotting技术检测ADF蛋白表达量及磷酸化水平，探索ADF参与地克珠利抑制球虫入侵的调控机制；借助体外肌丝聚合试验模型，应用共沉降法与SDS-PAGE检测技术测定ADF与F-actin的交联率，采用荧光分光光度法测定肌丝的聚合程度，采用透射电子显微镜观测肌丝的聚合形态，从球虫发育生物学角度，探索地克珠利作用ADF对肌动蛋白聚合与解聚影响的动力学问题，为阐明地克珠利抗鸡E. tenella作用机理及筛选抗球虫新药靶点提供理论依据。

结论摘要：

E. tenella是一种细胞内寄生虫，感染后必须侵入鸡的盲肠上皮细胞内才能维持生命和延续种群，并造成严重的临床鸡球虫病。肌动蛋白解聚因子(actin-depolymerizing factor, ADF)是一种在真核细胞中广泛存在的肌动蛋白结合蛋白，通过切断肌动蛋白丝和增加肌动蛋白丝解聚作用来调节肌丝的快速周转及肌动蛋白细胞骨架的形成，为虫体入侵宿主细胞提供源动力。地克珠利(Diclazuril)属三嗪苯乙晴化合物，具有良好的抗 E. tenella作用。然而，有关EtADF参与地克珠利抗E. tenella作用机制还未见报道。本研究采用RT-PCR技术扩增EtADF全长基因，并在体外进行表达，制备鼠抗EtADF抗血清，血清抗体效价达到1∶6400。通过人工合成EtADF磷酸化多肽，免疫兔，制备兔抗虫p-EtADF抗血清，抗体针对磷酸化多肽效价/抗体针对非磷酸化多肽效价大于10倍，为特异性磷酸化抗体。采用Western blotting技术研究了地克珠利对总EtADF和P-EtADF蛋白表达的影响。结果表明地克珠利降低了EtADF总蛋白的表达量，同时提高了p-EtADF的表达量，导致ADF活性下降。体外利用芘标记的兔骨骼肌动力学模型，采用荧光分光光度计检测分析地克珠利和EtADF对肌动蛋白聚合和解聚的影响，结果表明EtADF可促进肌丝的周转，地克珠利抑制了肌丝的这一反应。采用cosedimentation试验与SDS-PAGE技术判定EtADF是否结合F-肌动蛋白或影响G-肌动蛋白和F-肌动蛋白之间的平衡；采用Spin-down和SDS-PAGE分析判定EtADF是否具有G-肌动蛋白分离或F-肌动蛋白聚合增强活性；采用cosedimentation与SDS-PAGE分析判定ADF是否可以固定F-肌动蛋白。同时借助透射电子显微镜分析地克珠利作用EtADF对肌丝形态的影响。从入侵动力学角度全面研究了地克珠利作用EtADF抑制了球虫入侵作用机制，进而发挥抗球虫作用，这一研究结果为阐明地克珠利抗球虫作用机制以及EtADF作为抗球虫新药靶点提供了理论依据。