转录因子AP-1及NF-kB广泛参与了多种基因的表达调节。核苷酸序列分析发现在hIL-3基因5`侧翼存在AP-1及NF-kB的保守结合位点,本课题观察AP-1及NF-kB在IL-3基因表达中的作用。实验以正常人外周血淋巴细胞为材料,用化学合成的AP-1及NF-kB保守序列的寡聚核苷酸(ODN)与外周血淋巴细胞共培养,以人工合成IL-3编码序列的寡核苷酸作探针,提取细胞总RNA,通过核酸分子杂交,观察外源性AP-1及NF-kB的ODN 对hIL-3 mRNA表达的影响,同时利用凝胶迁移分析(EMSA)和抗体超迁移分析验证了上述转录因子的作用。采用蛋白激酶C(PKC)的激动剂PMA和钙离子导入剂A23187处理培养细胞,观察了信号传导途径对hIL-3基因表达调控的影响。结果表明(1)hIL-3基因的表达涉及转录水平的调节,诱导hIL-3基因表达需要PKC及钙离子依赖的双信号系统;(2)AP-1结合蛋白(c-Jun/c-Fos)是hIL-3基因表达的重要转录因子;而NF-kB并未参与hIL-3基因的表达;(3)在正常及肿瘤细胞(Jurkat)中,与-kB样序列结合的蛋白在EMSA中不同,提示在正常及肿瘤细胞中参与hIL-3基因表达调控的转录因子可能存在差异,超迁移分析排除了NF-kB p65亚基的结合作用,因此,该转录因子尚待进一步鉴定。