中文摘要：

血管生成与肿瘤的发生、发展及预后存在着密切关系，抗血管生成治疗已成为当前肿瘤治疗的研究热点之一。在前期工作中，我们已从正常内膜组织和子宫内膜癌中分离纯化出了血管内皮细胞(HEECs)，并对其生物学特性及基因表达特点进行了初步探讨。本研究拟从不同临床分期及组织学类型的子宫内膜癌中分离纯化HEECs，应用基因芯片进行基因表达谱检测，将获得基因在信号传导通路中进行定位。一方面筛选出在子宫内膜癌中与血管生成密切相关的差异表达基因，作为靶点构建siRNA质粒并转染内皮细胞，观察稳定转染后体内外的血管生成抑制情况，为内膜癌抗血管生成治疗提供新的靶点。另一方面，比较不同分组的内膜癌HEECs中基因表达差异，对于各组间明显差异表达的基因，用免疫组化进行大样本临床病理标本验证，筛选出可用于鉴别内膜癌侵袭性及恶性程度的新指标，将对进一步制定个体化治疗方案及判断预后具有很强的临床指导意义。

结论摘要：

研究背景子宫内膜癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，晚期患者的复发率和死亡率较高，血管生成与其发生、发展及预后存在密切关系，但具体不详。 研究方向从子宫内膜癌组织中分离纯化血管内皮细胞（HEEC），进行基因表达谱检测，以识别肿瘤内皮细胞的基因表达特点并筛选特异性靶向基因，为进一步抗血管生成研究提供切实有效的新靶点。 主要内容收集不同临床分期及组织学类型的子宫内膜癌组织和正常内膜组织标本，采用CD31单克隆抗体交联免疫磁珠法进行HEEC分选。对分离的HEEC进行体外培养，应用MTT法、划痕实验、Transwell侵袭小室模型、Matrigel胶体外管腔形成实验来比较二者增殖、迁移、侵袭和管腔形成能力。应用人类全基因组表达谱芯片检测子宫内膜癌HEEC及正常HEEC的基因表达谱，寻找与子宫内膜癌血管生成相关的基因。并以此为靶点在内皮细胞中进行相应基因沉默，在体外及裸鼠体内观察对HEEC增殖、侵袭及血管生成的抑制效果。同时，在临床切除的内膜癌标本中进行验证。 重要结果分选获得HEEC的纯度均在95%以上。体外培养呈现典型的内皮细胞形态特征，免疫荧光证实此内皮细胞表达CD31、CD34和vWF。在体外培养条件下，内膜癌来源HEEC在划痕实验修复面积与对照相比明显提高，在侵袭实验中穿过膜的细胞数也显著增加。HEEC在Matrigel胶上排列成多中心连接的血管腔样结构，肿瘤相关HEEC形成的血管腔样结构明显多于正常HEEC。与正常内膜中的HEEC相比，肿瘤来源的HEEC中共有186条基因表达差异，其中118条为上调，68条为下调。上调基因主要包括细胞外基质功能相关的基因、细胞周期调节基因、与细胞骨架功能有关的基因等。下调基因主要包括具有潜在抗血管生成和增殖作用的基因、凋亡诱导基因等。Pathway分析有显著性差异的通路中占主导地位有细胞周期、细胞黏附分子、细胞外基质及受体相互作用通路等。RT-PCR和Western结果与芯片结果具有良好的一致性。应用siRNA干扰技术抑制相应基因在内皮细胞中的表达后，HEEC增殖、侵袭及血管生成能力明显降低。