在自由基损伤的血管内皮细胞(vascular endothelial cell,以下简称VEC)凋亡病理模型基础上,探讨养阴代表药物麦冬有效部位群对凋亡细胞的保护作用,通过对VEC胞内Ca离子浓度的动态变化、信号转导、粘附分子及凋亡相关基因表达的测定,从细胞和分子水平上寻找其抗血瘀的有效部位群并阐明其作用机理。为中医药活血化瘀研究开辟了新的领域,?对指导临床治疗心脑血管疾病具有十分重要的意义。同时,本研究还为抗血栓中药的新药开发提供了基础。
本课题围绕养阴代表中药麦冬有效部位群/组分/成分,以人脐静脉血管内皮细胞HUVEC为靶点,建立了自由基损伤的细胞模型,运用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚集显微镜、基因芯片等技术了检测了VEC凋亡、胞内钙离子动态变化,信号转导及基因表达等指标。根据麦冬的化学成分,先后获得麦冬正丁醇提取部位、水提部位及氯仿部位、正丁醇8个洗脱组分、薯蓣皂苷元、豆甾醇、麦冬皂苷D。结果分析显示麦冬正丁醇部位、水提部位、氯仿部位均具有不同程度的保护血管内皮细胞的作用,其中正丁醇部位的药效作用更为显著。其作用机理与调节bcl-2、c-fos、TGF-β、自由基、血管活性物质、激活CREB、MAPK、NFκB等信号通路密切相关。三个正丁醇洗脱组分、薯蓣皂苷元、豆甾醇、麦冬皂苷D显示了不同程度的保护内皮细胞功能。麦冬皂苷D可通过内皮细胞功能基因、细胞周期基因、细胞凋亡基因、信号转导和粘附分子基因的调控对抗HUVEC细胞损伤及胞内钙超载。本课题研究提示了麦冬有效部位群/组分/成分的保护作用及分子机制,具有创新意义,为今后进一步研究中医药治疗"瘀血性"疾病的理论和有关新药的研制提供了新的依据和思路。