中文摘要：

2006年，我们发现ADAMTS13在血管内皮细胞中合成，主要位于核周区的胞浆内。我们的前期实验表明，在通过lentiviral病毒载体过表达重组ADAMTS13的血管内皮细胞内，VWF的位置从其固有的Weibel-Parade小体内，明显地分布到核周区。这一现象提示我们，在血管内皮细胞内可能存在ADAMTS13-VWF的相互作用，我们猜测其作用部位在内质网和/或分泌小体。但是，具体的ADAMTS13-VWF作用部位还不能确定。我们现在还不知道是什么环境因子在调控ADAMTS13的生物合成和分泌，但是，想像一下巨大的血管内皮细胞表面积，任何来自于血管内皮细胞的调控都可能在原位对血浆内ADAMTS13的水平和其生物学功能产生明显的影响。因此，血管内皮细胞任何微小的功能异常都可能影响到ADAMTS13的生物合成和分泌，从而导致TTP和/或其它的血栓性合并症的发生。

结论摘要：

ADAMTS13的功能缺乏是血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的主要发病原因之一。ADAMTS13及其底物VWF均在血管内皮细胞中合成，但它们在血管内皮细胞中是否发生相互作用还不清楚。为了检测在血管内皮细胞内ADAMTS13 和 VWF 是否位于同一部位，本项目采用免疫荧光的方法染色转染和非转染ADAMTS13 基因的血管内皮细胞。结果发现，原发的ADAMTS13 和 VWF 只有部分重叠，主要分布在核周区的内质网和高尔基体内。为了进一步明确ADAMTS13和VWF的位置关系和是否存在ADAMTS13-VWF的相互作用，我们构建了ADAMTS13-V5-His lentiviras 病毒载体来转染血管内皮细胞，使血管内皮细胞过表达重组的ADAMTS13。结果，在HUVEC、HAEC 和ECV304细胞内，重组的ADAMTS13-V5-His位于核周的胞浆区域内，但在HUVEC和HAEC细胞内，原生的VWF表现一些点状或者条状的染色，而在此区域重组的ADAMTS13-V5-His的染色则是阴性。为了确定血管内皮细胞表达的 ADAMTS13是否在细胞内调控VWF多聚体的大小，本项目采用Western杂交的方法评估ADAMTS13是否裂解VWF多肽。即用含有全长ADAMTS13-V5-His 的Lentiviras 病毒载体转染血管内皮细胞，用细胞裂解液裂解细胞。免疫沉淀检测ADAMTS13—VWF的相互作用。遗憾的是我们没有检测到它们的相互作用。于是我们想到ADAMTS13和VWF可能只在血管内皮细胞细胞的表面发生相互作用。通过免疫荧光证实，重组的和血浆中的ADAMTS13可以在血管内皮细胞表面快速地水解新锚链的UL-VWF。电子显微镜证实UL-VWF锚链到血管内皮细胞的表面，ADAMTS13在距离细胞表面2--4μm的地方，选择性地水解UL-VWF。