为了研究GAD67-GFP转基因小鼠鼠脑内代表伽玛氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)分布的绿色荧光蛋白标记细胞的三维空间分布,我们采用连续冷冻切削端面成像技术搭建一套高分辨率三维荧光/白光成像系统。该系统由一台改装为切片装置的高精度三维数控机床和自主搭建的由473nm蓝光激光光源,LED白光光源,体视显微镜和CoolSnap 制冷CCD组成的荧光/白光成像装置组成。我们利用该系统以13×13×50微米的分辨率采集了90~100天鼠龄GAD67-GFP转基因小鼠全脑中绿色荧光标记的三维分布,并通过测量系统的点扩散函数使用RL三维反卷积算法实现深层背景荧光的消除,并给出了鼠脑中绿色荧光信号的三维分布的体绘制重建结果。重建结果显示,GAD67-GFP转基因小鼠鼠脑中,荧光信号在嗅球中分布最强,其次为小脑皮层,最后为延髓和大脑。该系统提供的高分辨率和大成像范围,可用于实验用动物或者组织的荧光标记分布的断面图像测量。
英文主题词fluorescence imaging;cryo-section; Three-dimensional reconstruction;GAD67-GFP mouse