中文摘要：

甾体皂苷是一类重要的活性天然产物，其C-3位的糖链结构对其药理活性具有重要意义。前期发现了2种水解甾体皂苷α-1，2-鼠李糖或α-1，4-糖基的特异糖苷酶，并基本明确了位置选择性水解规律。本课题拟在以上工作基础上，利用已得到的两种酶蛋白的一级结构，通过同源模板蛋白模拟搭建两种糖苷酶的三维结构；嵌合薯蓣皂苷等底物分子，通过结合时的构象，确定影响两种酶底物空间结构及活性的关键氨基酸序列。克隆表达2种糖苷酶，并对关键氨基酸进行定点突变，测定酶活，以验证结构模拟结果的合理性，解释酶蛋白结构与糖基水解选择性间的关系。以上研究，不仅有助于进一步了解2种特异性甾体皂苷糖苷酶的空间位置选择性，及其与蛋白结构的关系，同时对普遍认识酶催化的本质及选择性的结构基础也具有重要意义。