中文摘要：

糖尿病血管病变是导致截肢和死亡的重要危险因素。血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素（Angiopoietin）以及它们相应的受体(Flt-1和Tie2)在血管生成过程中起着至关重要的作用。后肢缺血的2型糖尿病小鼠有明显的血管生成障碍以及VEGF和血管生成素信号传导减弱, 同时可溶性的受体细胞外段(sFlt-1和sTie2)释放也增加。因此,我们推测2型糖尿病血管生成障碍可能与sFlt-1和sTie2特异性抑制VEGF和血管生成素介导的血管新生有关。本项目应用分子生物学、免疫组化、激光多普勒成像等技术观察胰岛素治疗前后，糖尿病血管病变中sFlt-1和sTie2的表达、VEGF和血管生成素信号传导，以及下肢血流灌注的改变。并通过MMP7阻断sFlt-1的表达，观察VEGF信号传导和下肢血流灌注的改善，同时寻找阻断sTie2的方法, 为最终应用基因治疗糖尿病血管病变奠定基础。

结论摘要：

大血管病变是糖尿病最严重的并发症之一，由血管内皮功能异常和动脉粥样硬化引起，同时伴有侧支血管形成能力严重受损。预实验结果表明，后肢缺血性2型糖尿病小鼠骨骼肌VEGF信号通路PI3K/AKT信号传导减弱（p-AKT和p-eNOS表达减少），而sFlt-1的表达显著增加。本项目在前期基础上，通过晚期糖基化产物(AGE)干预及骨髓间充质干细胞（MSC）与血管内皮细胞共培养应用Western blot、RT-PCR等方法检测内皮细胞中VEGFR及VEGF下游PI3K/AKT/eNOS信号通路的表达变化，探讨了VEGF及其通路在糖尿病大血管病变血管再生障碍中的病理改变机制以及MSC对糖尿病患者血管再生促进作用的影响机制。结果发现AGE干预后，内皮细胞VEGFA mRNA表达与对照组相比升高（P<0.05），而内皮细胞表面VEGFR-1、VEGFR-2／β-actin与正常对照组相比表达明显减弱，经与MSC共培养后，VEGFR-1、VEGFR-2／β-actin表达有所升高（P<0.01）；同时AGE干预后，p-AKT／AKT、p-eNOS／eNOS与正常对照组相比表达明显减弱，经与MSC共培养后，p-AKT／AKT、p-eNOS／eNOS表达有所升高，VEGF信号传导有所增强（P<0.01）。本项目撰写SCI论文1篇，国家级核心期刊论文2篇，培养博士研究生2名，硕士研究生3名。该研究揭示了高血糖造成的AGE对VEGF受体造成破坏，使抑制性受体表达增多，从而削弱其下游信号通路的传导，造成内皮细胞功能障碍，影响血管再生，而MSC可通过影响VEGF受体及其下游的信号通路对糖尿病患者的血管再生产生促进作用的机制。对糖尿病大血管病变的发病机制研究和MSC的治疗作用具有创新性和重要生物学意义，对进一步深入研究MSC对血管内皮细胞的治疗机制提供新思路，同时对寻找新的药物靶点和筛选新药具有重要的理论和临床实用价值。