中文摘要：

从小麦胚乳中克隆了14-3-3基因，并进行了体外表达纯化。DNA序列分析表明与其他作物14-3-3基因同源达到83%以上，蛋白质谱分析也表明为14-3-3基因。分别选用2种质粒载体、2种大肠杆菌菌株在5种IPTG诱导浓度、4种培育时间、5种培育温度、5种葡萄糖浓度、5个诱导点条件下进行表达，得到了融合蛋白表达的适宜条件为以pET41c质粒为载体，37℃下在大肠杆菌Tuner (DE3)中培养达到OD600=0.6左右时，加入1%IPTG诱导培养4小时左右收获融合蛋白。通过S-蛋白纯化试剂盒得到了纯化的14-3-3融合蛋白，包涵体经8M尿素溶解复性后也纯化得到了具有活性的融合蛋白。将纯化的14-3-3重组蛋白结合到的层析柱上进行亲和杂交，结果表明淀粉粒淀粉合酶I、淀粉合酶II、淀粉分支酶IIa、淀粉分支酶IIb和ADP焦磷酸化酶大亚基与小麦胚乳14-3-3蛋白存在互作。分别以6类Wx蛋白组成的14个小麦品种和4个Wx蛋白组成相同小麦品种为试材，测定了其籽粒灌浆过程中4种淀粉合成关键酶的活性变化情况，表明4种酶活性高度相关并与淀粉合成进程密切相关，进一步说明淀粉合成酶之间存在互作。