结合SSH和单细胞RT-PCR技术研究热适应差异显示的基因与-东篱科研大数据发现系统（DRDS）

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结合SSH和单细胞RT-PCR技术研究热适应差异显示的基因与

项目名称：结合SSH和单细胞RT-PCR技术研究热适应差异显示的基因与
项目类别：面上项目
批准号：30371575
申请代码：H2101
项目来源：国家自然科学基金
研究期限：2004-01-01-2006-12-31

项目负责人：邹飞
负责人职称：教授
依托单位：南方医科大学
批准年度：2003

中文摘要：

机体对特殊恶劣环境做出的适宜反应、适应和脱适应是一切生物体普遍具有的基本功能，是生命的基本表现形式。为探讨热适应差异表达的基因与功能，本项目采用克隆目的基因的抑制性消减杂交（SSH）技术和研究离子通道功能与相关基因的单细胞RT-PCR技术，在热适应和热应激的人中性粒细胞上，构建热适应与热应激不同阶段的消减cDNA文库。分离、克隆与鉴定热适应目的基因。绘制基因差异表达谱。研究中性粒细胞膜上离子通道的

中文主题词：热适应;基因差异显示;离子通道;蛋白质组；神经保护；

英文摘要：

heat acclimatization; SSH; ion

英文主题词： heat acclimatization; SSH; ion

结论摘要：

机体对特殊恶劣环境做出的适宜反应、适应和脱适应是一切生物体普遍具有的基本功能，是生命的基本表现形式。本项目采用了抑制性消减杂交（SSH）、膜片钳、蛋白质双向电泳和RNA干扰等技术，在多种细胞水平上，研究了热适应的分子机制。主要结果如下①构建了大鼠肝细胞热适应差异表达基因消减文库，确认了13个上调表达基因，其中3种为已知基因，10个为新序列表达标签（EST）。②建立了可相对定量mRNA丰度的单细胞RT-PCR技术，证实了Ih电流参与调节下丘脑神经元IA电流活动特性。③在双向电泳技术平台上，研究了应激与适应对蛋白质合成的影响，筛选了应激适应相关蛋白。④研究了下丘脑神经元钾离子通道的温度效应，证实IA通道在温度敏感性的发育分化过程中起重要作用。⑤研究了ATP敏感性钾通道对缺氧条件下海马CA1区神经元保护作用及其机制，证实KATP通道可以作为p53的上游分子，通过对p53表达量的调节影响海马神经元在缺氧中的存活。

成果综合统计